本發明公開了鴨瘟病毒gE基因轉移載體pUC-ΔgE-EGFP，包含轉移載體pUC-ΔgE-EGFP的大腸桿菌種(Escherichia coli)JM109于2012年2月24日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC NO：M2012033；分類命名為大腸桿菌JM109/pUC-ΔgE-EGFP(Escherichia coli JM109/pUC-ΔgE-EGFP)。該轉移載體可通過與鴨瘟病毒同源重組，獲得EGFP標記基因的重組鴨瘟病毒，鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP，于2012年2月23日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC NO：V201210。該重組病毒將可以發展成為具有篩選標記的有效預防鴨瘟的新型疫苗。

1.一種鴨瘟病毒gE基因轉移載體pUC-ΔgE-EGFP，包含轉移載體pUC-ΔgE-EGFP的大腸桿菌種(Escherichia?coli)JM109于2012年2月24日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC?NO：M2012033；分類命名為大腸桿菌JM109/pUC-ΔgE-EGFP(Escherichia?coli?JM109/pUC-ΔgE-EGFP)。?2.權利要求1所述的轉移載體pUC-ΔgE-EGFP的制備方法，其特征在于包括以下步驟：?1)以鴨瘟病毒CHv株為材料，利用PCR擴增部分gE基因及其左側翼1073bp片段，克隆進載體pMD18-T，構建質粒pMD-L，利用PCR擴增部分gE基因及其右側翼1130bp片段，克隆進載體pMD18-T，構建質粒pMD-R；鴨瘟病毒CHv株保藏編號為：CCTCC?NO：V201209；?2)先將pMD-L用Hind?III和BamH?I酶切，回收1073bp片段，克隆進已用相應限制性內切酶酶切的pUC18載體，得到PUC-L載體，然后再將pMD-R中的部分gE基因及其右側翼1130bp片段以BamH?I和EcoR?I插入到已含有部分gE基因及其左側翼的pUC-L載體中，獲得載體pUC-ΔgE；?3)用ApaL?I和Mlu?I酶切質粒pEGFP-C1，回收包含CMV立即早期啟動子、EGFP基因、轉錄終止信號SV40polyA以及一個多克隆位點基因共2016bp片段的EGFP表達盒，然后對其進行補平；?4)先將載體pUC-ΔgE，用BamH?I酶切后，進行補平，再將其與3)中獲得補平后的EGFP表達盒連接，從而獲得轉移載體pUC-ΔgE-EGFP；?上述擴增PCR擴增部分gE基因及其左側翼1073bp片段的上、下游引物分別是：?上游引物：5′-AAGCTTCCTGAAAGATGTTCTAAG-3′?下游引物：5′-GGATCCTTGATGATAGTCTGCTATAC-3′?上述擴增PCR擴增部分gE基因及其右側翼1130bp片段的上、下游引物分別是：?上游引物：5′-GGATCCGTTTGTAGTCGGTCTCGG-3′?下游引物：5′-GAATTCCGTATTAACCTTTTGTAGCT-3′。?3.鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP，于2012年2月23日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC?NO：V201210。?4.權利要求3所述鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP的制備方法，其特征在于，由以下步驟完成：?1)鴨瘟病毒CHv株感染鴨胚成纖維細胞；鴨瘟病毒CHv株保藏編號為：CCTCC?NO：V201209；?2)轉移載體pUC-ΔgE-EGFP質粒轉染；權利要求1所述的轉移載體pUC-ΔgE-EGFP質粒轉染鴨瘟病毒CHv株感染鴨胚成纖維細胞；?3)收獲出現熒光斑的細胞；?4)結合無限稀釋法，通過空斑純化獲得重組鴨瘟病毒。?