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黑青斑河鲀干擾素IFNγ1及其制備方法和應用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-03
  • 技術成熟度:可以量產(chǎn)
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201110064456.0 
  • 技術(專利)名稱 黑青斑河鲀干擾素IFNγ1及其制備方法和應用 
  • 項目單位 中山大學
  • 發(fā)明人 盧丹琪,張旭,貝錦新,陳潔琳,易詩白,冷婷婷,林浩然 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 可以量產(chǎn)
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 孫尚
  • 發(fā)布時間 2022-01-03  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種黑青斑河鲀干擾素IFNγ1蛋白,其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示,該蛋白編碼基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示,編碼基因的制備方法,是用引物序列SEQIDNO:4和SEQIDNO:5為引物克隆得到干擾素蛋白IFNγ1的編碼基因;同時還公開了干擾素蛋白IFNγ1的制備方法,是將黑青斑河鲀IFNγ1的編碼基因克隆至表達載體,得到重組表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌,經(jīng)誘導后收集菌體,純化、酶切,得到黑青斑河鲀干擾素IFNγ1。本發(fā)明的黑青斑河鲀干擾素IFNγ1可以用于制備魚類免疫調(diào)節(jié)添加劑或免疫佐劑,具有誘導魚類免疫基因表達的作用。
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  • 02

    說明書

    1.一種黑青斑河鲀干擾素IFNγ1,其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。2.權(quán)利要求1所述黑青斑河鲀干擾素IFNγ1的編碼基因,其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。3.權(quán)利要求2所述黑青斑河鲀干擾素IFNγ1的編碼基因的制備方法,其特征在于以黑青斑河鲀總mRNA為模板,以RNA?Oligo?dT,其序列如SEQ?ID?NO:3為引物,進行反轉(zhuǎn)錄,得到cDNA;再以cDNA為模板,設計上游引物SEQ?ID?NO:4,下游引物SEQ?ID?NO:5,進行PCR,得到權(quán)利要求2所述黑青斑河鲀干擾素IFNγ1的編碼基因。4.權(quán)利要求1所述黑青斑河鲀干擾素IFNγ1的制備方法,是將黑青斑河鲀干擾素IFNγ1的編碼基因克隆至表達載體,得到重組表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌,培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌,經(jīng)誘導后收集菌體,純化、酶切,得到黑青斑河鲀干擾素IFNγ1。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于所述表達載體為大腸桿菌表達載體pET32a,重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建包括以下步驟:以含黑青斑河鲀干擾素IFNγ1編碼基因的質(zhì)粒為模板,設計上游引物SEQ?ID?NO:6,下游引物SEQ?ID?NO:7進行PCR,PCR產(chǎn)物克隆到pET32a上,得到重組表達質(zhì)粒。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于所述培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌的培養(yǎng)條件為含氨芐青霉素LB液體培養(yǎng)基,30℃,250rpm振蕩培養(yǎng)過夜,再接種到37℃預熱的含氨芐青霉素?TB液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)至OD600達到0.6。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于所述誘導為加入IPTG至終濃度為0.3mmol/L,誘導時間為7小時。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于所述純化是將總菌體用Bug?Buster?Master?Mix混勻重懸,室溫下孵育10-20min;4℃離心、沉淀用Bug?Buster?Master?Mix重懸、4℃再離心,移去上清,沉淀即包涵體;將包涵體重懸于經(jīng)1:10稀釋的Bug?Buster?Master?Mix?中,4℃離心,最終沉淀加鹽酸胍裂解液洗滌,鹽酸胍裂解液的pH7.8,含500mmol/L?NaCl。9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于所述酶切是用rEK酶。10.權(quán)利要求1所述黑青斑河鲀干擾素IFNγ1在制備上調(diào)ISG15?mRNA水平的制劑或抑制MX基因表達的制劑中的應用。
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專利技術附圖

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