本發明公開了一種聯合檢測禽流感H7N9和H9N2的四通道熒光定量PCR檢測方法及其試劑盒。本發明方法能夠同時檢測出待測標本中禽流感病毒H7N9的H7基因和N9基因，以及禽流感病毒H9N2的H9基因和N2基因。由于該方法引入了特異性擴增引物和熒光探針，使得檢測的靈敏度和特異性得到很大程度的增強，從而避免了其他檢測方法特異性不高容易漏診和誤診的問題。同時，該試劑盒根據本方法原理制得的試劑盒，可方便地同時檢測出禽流感病毒H7N9的H7基因和N9基因，以及禽流感病毒H9N2的H9基因和N2基因，準確率高。

1.一種用于聯合檢測禽流感H7N9和H9N2的熒光定量PCR引物組，其包括用于檢測禽流感H7N9亞型的H7基因的引物對及熒光探針、用于檢測禽流感H7N9亞型的N9基因的引物對及熒光探針、用于檢測禽流感H9N2亞型的H9基因的引物對及熒光探針、用于檢測禽流感H9N2亞型的N2基因的引物對及熒光探針，用于檢測H7、N9、H9、N2基因的熒光探針報告基團不相同；所述用于檢測禽流感H7N9亞型的H7基因的引物對及熒光探針的核苷 酸序列如下所示：H7-F：5'-TGCACTGCATGTTTCCATTCTT-3'(SEQ ID NO.1)；H7-R：5'-GGCTACAAAGATGTGATACTTTGGTTTAG-3'(SEQ ID NO.2)；H7-P：5'-ATGAAAACAAGGCCCATTGCAATGGC-3'(SEQ ID NO.3)；所述用于檢測禽流感H7N9亞型的N9基因的引物對及熒光探針的核苷 酸序列如下所示：N9-F：5'-TCGCGCCCTGATAAGCT-3'(SEQ ID NO.4)；N9-R：5'-GCATTCCACCCTGCTGTTG-3'(SEQ ID NO.5)；N9-P：5'-CCACTATCATCACCGCCCACAGTGT-3'(SEQ ID NO.6)；所述用于檢測禽流感H9N2亞型的H9基因的引物對及熒光探針的核苷 酸序列如下所示：H9-F：5'-CAATGGGGTTTGCTGCCT-3'(SEQ ID NO.7)；H9-R：5'-TTATATACAAATGTTGCATCTGC-3'(SEQ ID NO.8)；H9-P：5'-TTCTGGGCCATGTCCAATGGTTCT-3'(SEQ ID NO.9)；所述用于檢測禽流感H9N2亞型的N2基因的引物對及熒光探針的核苷酸序列如下所示：N2-F：5'-TGACACTGCACTTCAAGCAA-3'(SEQ ID NO.10)；N2-R：5'-TTGGTTCACATGTCACTACTTGAT-3'(SEQ ID NO.l1)；N2-P：5'-ATGAATGCAGCATCCCCTCGAAC-3'(SEQ ID NO.12)。2.一種用于聯合檢測禽流感H7N9和H9N2的熒光定量PCR試劑盒，其包含權利要求1所述的熒光定量PCR引物組。3.根據權利要求2所述的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含病毒RNA提取液、Tth DNA聚合酶、四通道熒光定量PCR Mix、陽性質控品、陰性質控品，所述四通道熒光定量PCR Mix中含有2×四通道熒光定量PCR buffer，dNTPs。4.根據權利要求3所述的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述2×四通道熒光定量PCR buffer中含有以下成分：Tricine pH8.7、Mg(OAc)₂、KOAc、甘油、DMSO、N，N，N-三甲基甘氨酸。5.一種聯合檢測禽流感H7N9和H9N2的四通道熒光定量PCR檢測方法，包括如下步驟：1)提取待測樣品中的病毒RNA；2)以得到的總RNA為模板，使用權利要求1所述的熒光定量PCR引物組進行四通道熒光定量PCR檢測；3)反應結束后，根據待測樣品的熒光Ct值判斷，待測樣品是否為禽流感病毒H7基因、N9基因、H9基因、N2基因陽性；上述方法用于非疾病的診斷與治療。6.根據權利要求5所述的四通道熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，四通道熒光定量PCR反應條件為：95℃1分鐘；58℃20分鐘；95℃1分鐘；95℃10秒，58℃70秒，68℃10s，采集熒光信號，40個循環。