本發(fā)明公開了一步法熒光定量RT?PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的引物，包括上游引物MrNV?QF1和下游引物MrNV?QR1，它們分別具有序列表SEQ.ID.No.1和序列表SEQ.ID.No.2的堿基序列。發(fā)明人據(jù)此建立了一步法熒光定量RT?PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的檢測方法，并制備了相應(yīng)的檢測試劑盒。本發(fā)明檢測方法及其試劑盒應(yīng)用于MrNV的檢測，無需將反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)分開，操作便捷且靈敏快速，有利于快速檢測MrNV及防控WTD。

1.一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的引物，其特征在于包括上游引物
MrNV-QF1和下游引物MrNV-QR1，它們分別具有以下的堿基序列：
上游引物MrNV-QF1：5'-ATTTAGATTGGGTCTGTGGA-3'，
下游引物MrNV-QR1：5'-GTTGAGTTCTGTTGGTGGA-3'。
2.一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的試劑盒，其特征在于包括含有上
游引物MrNV-QF1和下游引物MrNV-QR1的一步法熒光定量RT-PCR反應(yīng)液，它們分別具有以下
的堿基序列：
上游引物MrNV-QF1：5'-ATTTAGATTGGGTCTGTGGA-3'，
下游引物MrNV-QR1：5'-GTTGAGTTCTGTTGGTGGA-3'；
該試劑盒具體含有以下試劑：
(1)一步法熒光定量RT-PCR反應(yīng)液；
(2)陽性對照，含MrNV基因的RNA片段；
(3)陰性對照，不含MrNV基因的RNA片段；
(4)工作標(biāo)準(zhǔn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的試劑盒，
其特征在于：所述一步法熒光定量RT-PCR反應(yīng)液由2×One Step RT-PCR Buffer，
PrimeScript 1 step Enzyme Mix，上、下游引物，ROX Reference Dye II(50X)，H₂O組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的試劑盒，
其特征在于：所述一步法熒光定量RT-PCR反應(yīng)液共2.3mL，每劑反應(yīng)液為23μL，由2×One
StepRT-PCR Buffer 12.5μL，PrimeScript 1 step Enzyme Mix 1.0μL，濃度為10μ
mol/L的上、下游引物各1.0μL，ROX Reference Dye II(50X)0.5μL，H₂O 7.0μL組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的試劑盒，
其特征在于：所述陽性對照和陰性對照各200μL。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一步法熒光定量RT-PCR檢測羅氏沼蝦野田村病毒的試劑盒，
其特征在于：所述工作標(biāo)準(zhǔn)品包括含有1×10⁸、1×10⁷、1×10⁶、1×10⁵、1×10⁴、1×10³、1×
10²、1×10¹拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)品RNA各200μL。