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轉基因大豆A5547-127及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-25
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210128792.1 
  • 技術(專利)名稱 轉基因大豆A5547-127及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法 
  • 項目單位 廣州迪澳生物科技有限公司
  • 發明人 凌莉,劉津,高東微,唐大運,肖艷文,石磊 
  • 行業類別 健康用品-玻璃儀器
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 秦玉花
  • 發布時間 2021-07-25  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種轉基因大豆A5547-127及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法。檢測引物組包括4條特異性引物;檢測試劑盒包括引物液、反應液、DNA聚合酶和對照;試劑盒還可以有顯色劑。其檢測方法是通過提取待檢大豆品種的DNA、采用四條特異性引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶,在63~65℃對樣品DNA模板進行擴增,短時間擴增效率可達到10~10個拷貝,其鑒定采用加入SYBRGreenI觀察顏色變化或者利用濁度儀觀察反應管內沉淀的濁度變化判斷擴增與否,確定待檢大豆品種是否含有或為轉基因大豆A5547-127及其衍生品種。本發明具有快速高效、操作簡便、高特異性、高靈敏度、鑒定簡便、適合現場檢測等優點,適于推廣應用。
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  • 02

    說明書

    1.轉基因大豆A5547-127的LAMP檢測引物組,包括外引物1和外引物2、內引物1和內引物2,其核苷酸序列分別如下所示:外引物1:CCTGTAGCAATGGCAACA(SEQ?ID?No:1);外引物2:CGTGTAGATAACTACGATACGG(SEQ?ID?No:2);內引物1:TTATCCGCCTCCATCCAGTCTACTGGCGAACTACTTACTCTA(SEQ?ID?No:3);內引物2:CTTCCGGCTGGCTGGTTTAGTGCTGCAATGATACCG(SEQ?ID?No:4)。2.轉基因大豆A5547-127的LAMP檢測試劑盒,包括如下成分:(1)引物液:含有權利要求1所述的引物組,濃度分別為4~6μM外引物1、4~6μM外引物2,32~48μM內引物1、32~48μM內引物2;(2)反應液:含有10mM?dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液、150mM?MgSO4水溶液,三者的體積比是7~9:4~6:2;(3)DNA聚合酶:濃度為7~9U/μl;(4)對照:陽性對照為轉基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大腸桿菌質粒DNA,陰性對照為不含目的基因的反應混合液。3.根據權利要求2所述的轉基因大豆A5547-127的LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述引物液中含有5μM外引物1、5μM外引物2,40μM內引物1、40μM內引物2。4.根據權利要求2所述的轉基因大豆A5547-127的LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述DNA聚合酶為Bst?DNA聚合酶,濃度為8U/μl。5.根據權利要求2所述的轉基因大豆A5547-127的LAMP檢測試劑盒,其特征在于:所述反應液中,10mM?dNTP:10×ThermoPol反應緩沖液:150mM?MgSO4水溶液=8:5:2體積比。6.利用權利要求2~5任一項所述的試劑盒檢測轉基因大豆A5547-127的方法,包括如下步驟:(1)待檢樣品DNA的提取:采用CTAB法提取純化樣品DNA;(2)恒溫基因擴增反應:在200μl?PCR管配制反應體系:引物液1μl,反應液?12.5μl,DNA聚合酶1μl,待檢DNA?2~5μl,用滅菌去離子水補齊到25μl;設置陽性對照反應時,用轉基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大腸桿菌質粒DNA替代待檢DNA,設置陰性對照反應時,用不含目的基因的反應混合液替代待檢DNA;將配制好的PCR管混勻后離心,并于63~65℃反應60~90min,并在80℃持續2min;(3)結果判斷:通過觀察反應管內沉淀的濁度變化來判斷擴增結果。7.根據權利要求2~5任一項所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于:還含有顯色劑,所述顯色劑為熒光染料SYBRGreen?I。8.利用權利要求7所述的試劑盒檢測轉基因大豆A5547-127的方法,包括如下步驟:(1)待檢樣品DNA的提取:采用CTAB法提取純化樣品DNA;(2)恒溫基因擴增反應:在200μl?PCR管配制反應體系:引物液1μl,反應液?12.5μl,DNA聚合酶1μl,待檢DNA?2~5μl,用滅菌去離子水補齊到25μl;設置陽性對照反應時,用轉基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大腸桿菌質粒DNA替代待檢DNA,設置陰性對照反應時,用不含目的基因的反應混合液替代待檢DNA;將配制好的PCR管混勻后離心,并于63~65℃反應60~90min,并在80℃持續2min;(3)結果判斷:在反應管中加入1~2μl顯色劑,混勻,根據顯色結果來判斷擴增結果。
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專利技術附圖

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