本發(fā)明公開(kāi)了一種海倫兜蘭無(wú)菌播種快速繁殖方法。本發(fā)明以合適胚齡的種子作為外植體，在獨(dú)特的培養(yǎng)基上進(jìn)行無(wú)菌播種、原球莖的分化、原球莖的增殖和壯苗培養(yǎng)，在短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)的海倫兜蘭種苗。本發(fā)明的方法具有種子萌發(fā)率高、出苗快、種苗品質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)，海倫兜蘭種苗可用于供應(yīng)市場(chǎng)并應(yīng)用于遷地保護(hù)和自然回歸，有利于海倫兜蘭的資源保護(hù)和可持續(xù)利用。

1.一種海倫兜蘭無(wú)菌播種快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：
a、人工授粉和種子的獲得：選擇生長(zhǎng)健壯的海倫兜蘭(Paphiopedilum helenae
Aver.)母株進(jìn)行異株人工授粉，選擇授粉后120～180天的粉末狀種子作為外植體進(jìn)行無(wú)菌
播種；
b、外植體消毒和無(wú)菌播種：將授粉后120～180天的蒴果進(jìn)行消毒處理，切開(kāi)果實(shí)，將粉
末狀種子接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，
光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，胚萌發(fā)形成原球莖；所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為：每升含有椰子汁
50～100毫升、萘乙酸0.1～0.5毫克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、瓊脂6～7克，其余為1/
4MS培養(yǎng)基，pH 5.8～6.0；
c、類(lèi)原球莖的誘導(dǎo)和增殖：將步驟b得到的原球莖接種到類(lèi)原球莖的誘導(dǎo)和增殖的培
養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，獲
得類(lèi)原球莖，將類(lèi)原球莖接種到新的類(lèi)原球莖的誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培
養(yǎng)溫度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，類(lèi)原球莖大量增
殖；所述的類(lèi)原球莖的誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基為：每升含有6-芐基腺嘌呤5.0～10.0毫克、激
動(dòng)素5.0～10.0毫克、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1～2克、蔗糖30
克、瓊脂6～7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH 5.8～6.0；
d、類(lèi)原球莖的分化：將類(lèi)原球莖接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～30℃，光照
度1500～2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，類(lèi)原球莖分化出小苗；所述的分化培養(yǎng)基
為：每升含有6-芐基腺嘌呤0.2～1.0毫克、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋
白胨1～2克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、瓊脂6～7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH 5.8～
6.0；
e、壯苗培養(yǎng)：將小苗接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～30℃，光照度1500～
2000勒克斯，光照時(shí)間12～16小時(shí)/天，獲得完整植株；所述的壯苗培養(yǎng)基為：每升含有花寶
1號(hào)1～2克、花寶2號(hào)1～2克、MS培養(yǎng)基的維生素和肌醇成分、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁
100～200毫升、蛋白胨1～2克、香蕉勻漿50～150克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、瓊脂6～
7克，余量為水，pH 5.8～6.0；
f、試管苗移栽：將完整植株在自然光下煉苗10～15天，然后取出植株洗凈根部的培養(yǎng)
基，移栽到植金石、松樹(shù)皮和泥炭土按質(zhì)量比2～3:2～3:1混合的栽培基質(zhì)中培養(yǎng)獲得海倫
兜蘭種苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海倫兜蘭無(wú)菌播種快速繁殖方法，其特征在于，步驟b所述的
將授粉后120～180天的蒴果進(jìn)行消毒處理具體為：將蒴果用體積分?jǐn)?shù)70％～80％的酒精浸
泡30～60秒后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％～0.2％的升汞溶液消毒10～20分鐘，無(wú)菌水漂洗4～5次。