1.青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是包括如下步驟：
(1)細胞內蛋白的提取：
在LB培養基中接種青霉菌，培養，從接種1h或2h起至170h或180h，選8～12個時間點，每個時
間點收集1～3份細胞，每份細胞分別用冰浴的0.5～5mM苯甲基磺酰化氟-超純水溶液洗滌3～5次；
－10～4℃收集洗滌后的細胞，在液氮中研磨成細胞粉末；取0.1～1g所述細胞粉末懸浮于裂解緩沖液
中，再加入10～15μl?DNaseⅠ和RNaseA的水溶液，冰浴放置15～30min，加入10～15μl濃度為0.8～
1.2mM苯甲基磺酰化氟-異丙醇溶液，超聲10～15秒/次，共3～5次,以10,000～100,000×g的轉速離
心10～60min后，收集上清液，在-15～-30℃的條件下與1～10倍于上清液體積的冰浴的丙酮混合，
放置2～10h；再以10,000～100,000×g的轉速離心10～60min，將沉淀物凍干，得到細胞內蛋白組，
測定蛋白含量；
所述裂解緩沖液的配制為：5～8mol尿素、1～3mol硫脲、10～50mg?3-((3-膽汁氨丙
基)二甲基胺)-1-丙磺酸、20～50mmol?Tris堿,加水定容至1L；
所述DNaseⅠ和RNaseA的水溶液的配制為：8～15mg?DNaseI，2～4mg?RNaseA、30～
60mmol?MgCl2、0.1～1mol?Tris-HCl，調pH為7.0，加水定容至1L；
(2)細胞外蛋白的提取：
在LB培養基中接種青霉菌，培養，在生長周期的OD540值分別在1～10之間取3-5份1L
的發酵液，在1～10℃，10,000～100,000×g離心10～60min，上清液通過0.1～1μm孔徑過
濾，濾液加入冰浴的三氯乙酸至三氯乙酸終濃度為10～20mg/100ml，進行沉淀，用體積濃
度為80％-90％的丙酮水溶液洗滌沉淀4－5次，得到細胞外蛋白組，測定蛋白含量。
2.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述時間點為10個,
每個時間點收集2～3份細胞。
3.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述苯甲基磺酰化氟-
超純水溶液的濃度為1～2mM。
4.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述步驟(1)或步驟
(2)中轉速為20,000×g，離心時間為40min。
5.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述DNaseⅠ和RNaseA
的水溶液的配制中所述DNaseⅠ為10～12mg。
6.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述DNaseⅠ和RNaseA
的水溶液的配制中所述RNaseA為2.5～3mg。
7.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述苯甲基磺酰化氟-
異丙醇溶液的濃度為1mM。
8.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述步驟(1)中上清
液與冰浴的丙酮混合時的溫度條件為-20℃。
9.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述步驟(2)中發酵
液的份數為4份。
10.根據權利要求1所述的青霉菌細胞內外蛋白質組的提取，其特征是所述步驟(2)中所述
孔徑為0.45μm。
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