本發(fā)明公開了一種檢測親水支架上細胞培養(yǎng)狀態(tài)的方法，屬于細胞生物學檢測領(lǐng)域。該方法包括：將待檢測細胞接種到親水支架上進行培養(yǎng)，至待檢測細胞在親水支架上的生長融合率為90％?95％時，獲得支架?細胞復(fù)合體系。采用吖啶橙染色液對支架?細胞復(fù)合體系進行熒光染色，并采用磷酸緩沖鹽溶液對染色后的支架?細胞復(fù)合體系進行洗滌。將洗滌后的支架?細胞復(fù)合體系置于激光掃描共聚焦顯微鏡下，并利用綠色熒光通道和橙色熒光通道進行觀察，從而檢測得到親水支架上細胞的培養(yǎng)狀態(tài)。本發(fā)明實施例提供的方法能夠清晰、準確地檢測親水支架上細胞的分布情況及生長狀態(tài)，且操作簡便，便于規(guī)模化推廣應(yīng)用。

1.一種檢測親水支架上細胞培養(yǎng)狀態(tài)的方法，包括：步驟a、以2倍于親水支架體積的磷
酸緩沖鹽溶液浸泡所述親水支架過夜，再用磷酸緩沖鹽溶液清洗所述親水支架2～3次；
將待檢測細胞接種到所述親水支架上進行培養(yǎng)，接種密度為1.8×10⁵-2.2×10⁵個細
胞/毫升，至所述待檢測細胞在所述親水支架上的生長融合率為90％-95％時，獲得支架-細
胞復(fù)合體系；
所述親水支架為魔芋葡甘聚糖微球支架；
所述待檢測細胞為SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞；
所述支架-細胞復(fù)合體系為魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體
系；
步驟b、采用吖啶橙染色液對所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)
合體系進行熒光染色，所述吖啶橙染色液為濃度為0.8-1.2mg/ml的吖啶橙乙醇溶液，包括：
用1ml微量移液器將所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系
移入激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿內(nèi)，棄去上層清液，并用磷酸緩沖鹽溶液反復(fù)清洗3
次，然后用1ml磷酸緩沖鹽溶液使所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)
合體系懸浮，形成魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系懸浮液；
每1ml所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系懸浮液中加入
1ul所述吖啶橙染色液，然后孵育10分鐘，棄去上層清液；
再次用磷酸緩沖鹽溶液清洗三次后，用1ml無血清a-DMEM培養(yǎng)基重新懸浮魔芋葡甘聚
糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系，得到用吖啶橙染色后的魔芋葡甘聚糖微
球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系；
步驟c、將染色后的所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系置
于激光掃描共聚焦顯微鏡下，并利用綠色熒光通道和橙色熒光通道進行觀察，從而檢測得
到所述魔芋葡甘聚糖微球支架上所述SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)狀態(tài)；
所述綠色熒光通道使用的激發(fā)光的波長為515-545nm，所述橙色熒光通道使用的激發(fā)
光的波長為590-620nm；
采用所述激光掃描共聚焦顯微鏡進行觀察的過程中，沿Z軸方向每隔0.8-1.2μm對所述
魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體系進行一次斷層掃描，待斷層掃
描完成后，將全部斷層掃描圖像按Z軸方向上的順序疊加，獲得所述SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細
胞在所述魔芋葡甘聚糖微球支架上三維狀態(tài)；
采用所述激光掃描共聚焦顯微鏡觀察洗滌后的魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間
充質(zhì)干細胞復(fù)合體系時，使所述魔芋葡甘聚糖微球支架-SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合體
系懸浮在無血清的DMEM培養(yǎng)基中。