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一種同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-01
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201611129493.4 
  • 技術(專利)名稱 一種同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法 
  • 項目單位 合肥工業大學
  • 發明人 汪家權,張發宇,余金衛,蘇雨,張曉萌,匡武 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳瑋
  • 發布時間 2022-02-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,先將藍藻破壁并固液分離得到藻膽蛋白粗提液,再進行兩步鹽析,獲得沉淀后用磷酸鹽緩沖液溶解,并用磷酸鹽緩沖液作為透析液將溶解后的溶液透析,以獲得透析后的藻膽蛋白溶液,最后進行纖維素柱層析以及羥基磷灰石柱層析,以獲得了試劑級的藻藍蛋白和試劑級的別藻藍蛋白。本發明以水華新鮮藍藻為原料,通過采用鹽析聯合柱層析分離純化試劑級藻藍蛋白和試劑級別藻藍蛋白,與傳統層析法工藝相比,在兼顧蛋白質回收率的前提下,能同時提取純化兩種高純度的藻藍蛋白和別藻藍蛋白,提高了藍藻細胞中高價值蛋白綜合提取純化的效率,并且可以放大。
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  • 02

    說明書

    1.一種同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于,包括如下步驟:S1,將藍藻進行破壁以產生藻液,將所述藻液進行固液分離,所得液體即為藻膽蛋白粗提液;S2,向所述藻膽蛋白粗提液中加入適量硫酸銨,混勻并靜置后離心,獲得上清液;S3,向步驟S2中獲得的上清液中追加適量硫酸銨,混勻并靜置后離心,獲得沉淀;S4,將步驟S3中獲得的沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解,并用磷酸鹽緩沖液作為透析液將溶解后的溶液透析脫鹽,脫鹽后的溶液再離心棄去變性蛋白以獲得透析后的藻膽蛋白溶液;S5,將步驟S4中透析后的藻膽蛋白溶液,過平衡好的陰離子纖維素層析柱,并依次用含不同離子強度的洗脫液洗脫,分別收集洗脫的組分,檢測組分中藻藍蛋白和別藻藍蛋白的純度和濃度,將主要富含藻藍蛋白和別藻藍蛋白的組分用磷酸鹽緩沖液作為透析液進行透析脫鹽以獲得含藻藍蛋白和別藻藍蛋白的混合液;S6,將步驟S5中獲得的混合液過平衡好的羥基磷灰石層析柱,并依次用含不同離子強度的洗脫液洗脫,分別收集洗脫的組分,以獲得了試劑級的藻藍蛋白和試劑級的別藻藍蛋白。2.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S1的具體操作為:將-20℃條件下冷凍保存的新鮮藍藻在25-35℃下融化,再放入-20℃條件下冷凍,重復此步驟至少2次,以實現藍藻細胞的破壁;將藍藻破壁后的溶液用多層紗布粗過濾,去除藻渣,再離心后去渣即可獲得藻膽蛋白粗提液。3.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S2中硫酸銨添加量為1.0~1.4mol/L。4.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S3中追加硫酸銨使其物質的量濃度達到1.6~2.2mol/L。5.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S4中磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01mol/L,pH為6.5,選用截留量為100KDa的透析袋進行透析脫鹽。6.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S5中采用0.02mol/L、pH=6.5、3~5倍柱體積的磷酸鹽緩沖液平衡纖維素層析柱,平衡后,將透析后的藻膽蛋白溶液上樣,上樣量為柱床體積的1/3~2/3。7.根據權利要求1或6所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S5中用分別含0.1、0.3、1.5mol/L氯化鈉的0.02mol/L、pH=6.5的磷酸鹽緩沖液洗脫,洗脫線速度為200~300cm/h。8.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S6中采用0.01mol/L、pH=7.0、3~5倍柱體積的磷酸鹽緩沖液平衡羥基磷灰石層析柱,平衡后,將步驟S5中獲得的混合液上樣,上樣量為柱床體積的1/3~2/3。9.根據權利要求1或8所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S6中采用含有0.1mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖液洗脫,磷酸鹽緩沖液的濃度梯度分別為0.02、0.05、0.1mol/L,pH=7.0,洗脫線速度為200~300cm/h。10.根據權利要求1所述的同時分離純化試劑級的藻藍蛋白與別藻藍蛋白的方法,其特征在于:所述步驟S2、步驟S3中的離心操作均在4℃下進行。
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