本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種云芝多糖提取物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)深層發(fā)酵培養(yǎng)云芝菌絲體后，發(fā)酵產(chǎn)物分離出菌絲體和發(fā)酵液，菌絲體烘干，粉碎過(guò)篩脫脂干燥后，進(jìn)行熱水浸提并濃縮，得到浸提濃縮液；發(fā)酵液超濾去除小分子物質(zhì)后，濃縮，得到超濾濃縮液。超濾濃縮液和浸提濃縮液通過(guò)去蛋白、乙醇沉淀、雙氧水脫色，透析最后經(jīng)真空冷凍干燥，分別制得云芝胞內(nèi)多糖提取物和云芝胞外多糖提取物。本發(fā)明制備過(guò)程簡(jiǎn)單、可高效高質(zhì)大量生產(chǎn)，提取物對(duì)人體無(wú)毒害，具有良好降血脂的生理作用，可用于開(kāi)發(fā)降血脂藥物或保健食品。

1.一種云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于包含如下步驟：
(1)云芝(Coriolus versicolor)液體深層發(fā)酵后，分離得到云芝菌絲體和發(fā)酵液，其
中，云芝菌絲體干燥粉碎并過(guò)篩后，脫脂，干燥，得到脫脂后的菌絲體；發(fā)酵液超濾去除小分
子物質(zhì)，得到云芝超濾液；所述的云芝液體深層發(fā)酵的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖50g，NH₄NO₃
2g，KH₂PO₄ 2g，MgSO₄·7H₂O 1g，維生素B₁ 0.05g，水1000mL，pH 6.5；
(2)熱水浸提脫脂后的菌絲體，得到含云芝胞內(nèi)多糖的浸提液；
(3)將步驟(1)得到的云芝超濾液和步驟(2)得到的浸提液分別濃縮，得到超濾濃縮液
和浸提濃縮液；
(4)將步驟(3)制備得到的超濾濃縮液和浸提濃縮液分別采用胰蛋白酶和Sevage法去
蛋白，得到去蛋白后的胞外多糖提取液和胞內(nèi)多糖提取液；
(5)用乙醇分別沉降步驟(4)得到的胞外多糖提取液和胞內(nèi)多糖提取液中的多糖，然后
離心分離得到沉淀，脫色透析干燥后，分別制得云芝胞內(nèi)提取物和云芝胞外多糖提取物；
步驟(4)中所述的胰蛋白酶和Sevage法，包含如下步驟：
①將步驟(3)制備得到的濃縮液分別調(diào)pH至8.0；然后將胰蛋白酶加入濃縮液中充分混
合并37℃振蕩30～60min，再水浴滅酶10～15min，冷卻至室溫；
②去蛋白后的濃縮液加入0.2倍體積的氯仿正丁醇混合液，劇烈振蕩30～40min；然后
離心，棄取蛋白層及有機(jī)溶液，回收上清液；
③重復(fù)步驟②2～3次，得到去蛋白后的多糖提取液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(1)中所述的脫脂方法為：菌絲體粉末與石油醚按體積比為1:2混勻，振蕩或攪拌
處理2～3d，脫去菌絲體中的脂質(zhì)，離心留沉淀；重復(fù)脫脂1～2次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(1)中所述的超濾條件為進(jìn)膜壓力為10bar，通量3～5L/min，物料溫度22℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(2)中所述的熱水浸提的條件為：料液比為1:30，提取時(shí)間為2～3h，提取溫度為90
℃，提取次數(shù)為1～3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(5)中所述的脫色透析干燥的方法為：用水溶解沉淀并調(diào)節(jié)多糖溶液pH至8.0；然
后滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30％的H₂O₂溶液，于50～55℃水浴保溫2～3h，對(duì)其進(jìn)行氧化脫色處理；然
后將多糖溶液裝入截留分子量為8000～15000Da的透析袋中透析2～3d，每8～10h更換一次
水；對(duì)透析完成后的溶液進(jìn)行濃縮，并真空冷凍干燥，獲得云芝多糖提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(1)中所述的云芝(Coriolus versicolor)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)的方法，包含如下步
驟：
(Ⅰ)將云芝斜面母種活化培養(yǎng)后轉(zhuǎn)接至斜面固體培養(yǎng)基中，24～27℃培養(yǎng)10～15d，直
至菌絲鋪滿斜面為止，得到云芝斜面菌種；
(Ⅱ)從步驟(Ⅰ)制備得到的云芝斜面菌種上挑取4～6菌塊，接種至200mL的液體發(fā)酵培
養(yǎng)基中，室溫靜置24h，待菌塊傷口處愈合后，在150rpm，27的條件下振蕩培養(yǎng)6d，制得一級(jí)
種子液；
(Ⅲ)將步驟(Ⅱ)制備得到的一級(jí)種子液轉(zhuǎn)入50L種子罐培養(yǎng)二級(jí)種子液，接種量為
7％，培養(yǎng)溫度為27℃，轉(zhuǎn)速為150rpm，罐壓為0.05～0.07MPa，通氣量1.5m³/h，培養(yǎng)3d后轉(zhuǎn)
入500L發(fā)酵罐培養(yǎng)，初始培養(yǎng)條件溫度，轉(zhuǎn)速及罐壓與種子罐相同，通氣量為12m³/h，培養(yǎng)3
～5d。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(Ⅰ)所述的斜面固體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨1g，(NH₄)
₂SO₄ 2g，MgSO₄·7H₂O 1g，KH₂PO₄ 1g，瓊脂20g，加蒸餾水定容至1000mL，pH調(diào)至6.5。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的云芝多糖提取物的制備方法，其特征在于：
步驟(Ⅱ)和(Ⅲ)中用于一級(jí)種子液和二級(jí)種子液培養(yǎng)以及發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：
步驟(1)中所述的云芝液體深層發(fā)酵的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖50g，NH₄NO₃ 2g，KH₂PO₄ 2g，
MgSO₄·7H₂O 1g，維生素B₁ 0.05g，水1000mL，pH 6.5。
9.一種云芝多糖提取物，其特征在于根據(jù)權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的制備方法制備得
到。
10.權(quán)利要求9所述的云芝多糖提取物在制備降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物或保健食品
中的應(yīng)用。