本發(fā)明涉及一種Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三錳納米顆粒的制備方法，包括：葉酸與NH?PEG?COOH混合得FA?PEG?COOH；將乙酰丙酮錳與PEI反應(yīng)得MnO?PEI NPs，F(xiàn)I修飾，加入NOTA?NHS和活化后的FA?PEG?COOH，乙酰化，得NOTA?MnO?PEI?Ac?FI?(PEG?FA)NPs；乙酸銨與[Cu]CuCl反應(yīng)后加到NOTA?MnO?PEI?Ac?FI?(PEG?FA)NPs溶液中，反應(yīng)即得。本發(fā)明的方法制備過程簡單，易于操作；所得材料具有良好的PET/MR雙模態(tài)成像效果，在多模態(tài)納米造影劑領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價值。

1.一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三錳納米顆粒的制備方
法，包括：
(1)將EDC加入到葉酸FA溶液中活化，然后加入NH₂-PEG-COOH，攪拌1-2天，得到FA-PEG-
COOH；
(2)將乙酰丙酮錳分散到PEI溶液中，攪拌，然后150-180℃下反應(yīng)12-24h，離心，透析，
冷凍干燥，得到PEI穩(wěn)定的四氧化三錳納米顆粒Mn₃O₄-PEI NPs；
(3)向步驟(2)中的Mn₃O₄-PEI NPs溶液中加入異硫氰酸熒光素FI溶液，攪拌，得到Mn₃O₄-
PEI-FI NPs；
(4)向步驟(3)中的Mn₃O₄-PEI-FI NPs溶液中加入螯合劑NOTA-NHS溶液，攪拌，得到
NOTA-Mn₃O₄-PEI-FI NPs；
(5)將步驟(1)中的FA-PEG-COOH的溶液經(jīng)過EDC活化，然后加入到步驟(4)中的NOTA-
Mn₃O₄-PEI-FI NPs溶液中，攪拌，得到功能化的四氧化三錳納米顆粒NOTA-Mn₃O₄-PEI-FI-
(PEG-FA)NPs，其中FA-PEG-COOH與NOTA-Mn₃O₄-PEI-FI NPs的摩爾比為22:1；
(6)將三乙胺N(C₂H₅)₃和乙酸酐Ac₂O加入到步驟(5)中的NOTA-Mn₃O₄-PEI-FI-(PEG-FA)
NPs溶液，進行乙酰化，透析，冷凍干燥，得到功能化的四氧化三錳納米顆粒NOTA-Mn₃O₄-PEI-
Ac-FI-(PEG-FA)NPs；
(7)將乙酸銨溶液加入到[⁶⁴Cu]CuCl₂的鹽酸溶液中，得到[⁶⁴Cu]Cu(OAc)₂，攪拌，然后加
入到步驟(6)中的NOTA-Mn₃O₄-PEI-Ac-FI-(PEG-FA)NPs的溶液中40-45℃反應(yīng)30-45min，分
離純化，得⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三錳納米顆粒⁶⁴Cu-NOTA-
Mn₃O₄-PEI-Ac-FI-(PEG-FA)NPs。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)FA與NH₂-PEG-COOH的摩爾比為1.5-2：1；
EDC與FA的摩爾比為1：1；活化時間為2-3h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中乙酰丙酮錳與PEI的質(zhì)量比為0.25:
0.1；PEI溶液的溶劑為二甘醇DEG；乙酰丙酮錳與DEG的比例為0.25g:15mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中FA溶液和步驟(3)中FI溶液的溶劑均
為二甲基亞砜DMSO。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中FI與Mn₃O₄-PEI NPs的摩爾比為7:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中NOTA-NHS與Mn₃O₄-PEI-FI NPs的摩爾
比為12:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中EDC活化的時間為2-3h；EDC與FA-PEG-
COOH的摩爾比為20:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)中N(C₂H₅)₃加入后攪拌20-40min，然后加
入Ac₂O，攪拌反應(yīng)12-24h；N(C₂H₅)₃、Ac₂O和NOTA-Mn₃O₄-PEI-FI-PEG-FA NPs的摩爾比為120-
660:100-550:1。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(7)中乙酸銨、[⁶⁴Cu]CuCl₂和NOTA-Mn₃O₄-
PEI-Ac-FI-(PEG-FA)NPs的比例為每mCi的[⁶⁴Cu]CuCl₂加入0.3mg的NOTA-Mn₃O₄-PEI-Ac-FI-
(PEG-FA)NPs。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種⁶⁴Cu標記葉酸靶向的功能化聚乙烯亞胺穩(wěn)定的四氧化三
錳納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(7)中鹽酸溶液的濃度為0.1M；乙酸銨的濃
度為0.4M，且pH為5.5；[⁶⁴Cu]Cu(OAc)₂的放射性活度為37-111MBq；分離純化為：用PD-10脫
鹽層析柱分離純化，以pH＝7.2-7.4的PBS為流動相，用放射性活度儀測量放射性活性以收
集純⁶⁴Cu標記的功能化聚乙烯亞胺介導(dǎo)的四氧化三錳納米顆粒。