本發明涉及一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備方法，包括：FA連接到NH-PEG-COOH上形成COOH-PEG-FA；水熱法合成PEI包覆的FeO納米顆粒（FeO-PEI）；FeO-PEI納米顆粒表面修飾異硫氰酸熒光素(FI)；COOH-PEG-FA連接到FeO納米顆粒的表面；最后對FeO納米顆粒表面PEI剩余氨基進行乙酰化修飾以增加其生物相容性，用于MRI成像診斷。本發明工藝簡單，反應條件溫和，易于操作；制備的FeO磁性納米顆粒具有良好的膠體穩定性、生物相容性和腫瘤靶向性，在體內腫瘤靶向診斷領域具有潛在的應用價值。

1.一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備方法，包括：
(1)將亞鐵鹽溶解于超純水中，加入NH₃·H₂O并于空氣氣氛下攪拌，然后將混合溶液轉移
到高壓反應釜中，并將0.1g/mL的超支化聚乙烯亞胺PEI水溶液也加入到高壓反應釜中，攪
拌混合均勻后，于130～140℃反應2～4小時；反應結束后，自然冷卻至室溫，將沉淀分離洗
滌純化后，即得PEI包裹的四氧化三鐵納米顆粒Fe₃O₄-PEI；
(2)將FA溶解于DMSO中后，先用EDC和NHS活化2～4h，然后逐滴加入到NH₂-PEG-COOH
的DMSO溶液中，攪拌反應2～4天，透析，然后真空冷凍干燥，即得COOH-PEG-FA；
(3)將步驟(1)中制備的Fe₃O₄-PEI納米顆粒用DMSO洗滌后，重新分散于DMSO中，再
將DMSO溶解的FI溶液加入到上述Fe₃O₄-PEI的DMSO溶液中，攪拌反應1～3天后，產物
Fe₃O₄-PEI-FI分離洗滌，然后分散到DMSO中；
(4)步驟(2)中制備的COOH-PEG-FA以及EDC和NHS溶解于DMSO后，攪拌活化2～4h；
然后將活化的COOH-PEG-FA溶液加入到步驟(3)制備的Fe₃O₄-PEI-FI溶液中，攪拌反應
2～4天，再分離洗滌，并分散于超純水中，得到Fe₃O₄-PEI-FI-PEG-FA納米顆粒水溶液；其中，
COOH-PEG-FA與EDC、NHS的摩爾比為1:4～6:4～6；COOH-PEG-FA與Fe₃O₄納米顆粒表面
氨基的摩爾比為1:4～6；
(5)向步驟(4)制備的Fe₃O₄-PEI-FI-PEG-FA納米顆粒水溶液中加入三乙胺，并攪拌20～40
分鐘；然后向上述溶液中加入乙酸酐，繼續攪拌反應20～30小時；分離洗滌并分散于超純水
中，即得。
2.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(1)中的亞鐵鹽為FeCl₂·4H₂O，亞鐵鹽、超純水、NH₃·H₂O的
配比為1～1.5g:7.5～8.0mL:6.0～6.5mL，亞鐵鹽與超支化聚乙烯亞胺PEI質量比為2～3:1。
3.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(1)中的NH₃·H₂O質量百分比濃度為25-28％。
4.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(1)中的超支化聚乙烯亞胺PEI的分子量為25000。
5.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(2)中FA、EDC和NHS的摩爾比為1:0.5～1:0.5～1，FA和
NH₂-PEG-COOH的摩爾比為1～3:1。
6.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(2)中NH₂-PEG-COOH的分子量為2000。
7.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(3)中FI與Fe₃O₄-PEI表面氨基的摩爾比為1:45～55。
8.根據權利要求1所述的一種基于葉酸修飾的四氧化三鐵納米顆粒的靶向MRI造影劑的制備
方法，其特征在于：所述步驟(5)中的三乙胺、乙酸酐與Fe₃O₄納米顆粒表面的PEI上伯氨
基摩爾比為4～6:4～6:1。