本發明公開了一種花臉蘑蛋白LsAPII，其N端氨基酸序列為：DGEYVNDLEGTISVDA；其制備方法為將花臉蘑子實體粉末在磷酸緩沖液中浸泡，離心，取上清液；然后分別加入硫酸銨至飽和度為50％和70％，在0～6℃下放置6～16h，分別離心，收取上清液或沉淀；再用磷酸緩沖液溶解，透析、超濾管超濾、陰離子交換柱分離和0.3mol/L氯化鈉溶液洗脫，即得花臉蘑蛋白LsAPII。本發明LsAPII對煙草花葉病毒抑制效果好；其次確定LsAPII為單一蛋白，為其遺傳工程應用提供了基礎；還有LsAPII為天然提取物，對人類和環境均無害；另外LsAPII制備方法簡單，原料易得，成本較低。

1.一種抗植物病毒的花臉蘑蛋白LsAPII，所述花臉蘑蛋白來自花臉蘑
(Lepista?sordida)，其N端氨基酸序列為：DGEYVNDLEGTISVDA；經SDS聚丙
烯酰胺凝膠電泳鑒定，所述花臉蘑蛋白LsAPII的分子量為17.8KD；所述的花
臉蘑蛋白LsAPII，按照如下方法制備：
(1)、將花臉蘑子實體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml
中浸泡2h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50％，在4℃放置
8h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70％，在4℃放置
8h，10000rpm離心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀，然后經3
倍重量的重蒸餾水透析8小時，將透析得到的透析液分別用Millipore公司生
產的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進行超濾截留，留取分子量在9～
90KD的蛋白溶液；
(5)將步驟(4)所得蛋白溶液經陰離子交換柱分離，用0.3mol/L的氯
化鈉洗脫，收集洗脫液，洗脫液中所含物質即為花臉蘑蛋白LsAPII。
2.權利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII的制備方法，包括如下步驟：
(1)、將花臉蘑子實體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml
中浸泡2h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50％，在4℃放置
8h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70％，在4℃放置
8h，10000rpm離心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀，然后經3
倍重量的重蒸餾水透析8小時，將透析得到的透析液分別用Millipore公司生
產的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進行超濾截留，留取分子量在9～
90KD的蛋白溶液；
(5)將步驟(4)所得蛋白溶液經陰離子交換柱分離，用0.3mol/L的氯化
鈉洗脫，收集洗脫液，洗脫液中所含物質即為花臉蘑蛋白LsAPII。
3.權利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII在防治煙草花葉病毒病上的應用。