本發明公開了一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒及其操作方法，包括A液和B液，A液和B液均是包含0.1M氯化鈉的0.1M Tris緩沖液，A液中包含羧基化磁珠，B液中包含羧基化微球，它們均通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA一半互補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠或微球上。與傳統光波導生物傳感器比較，本案所涉及的試劑盒能夠實現重復利用；本發明采用的方法，能夠在溶液中快速檢測出游離的miRNA，過程更簡單，效率更高，并且能夠高通量的檢測樣品；通過連接微球，能夠顯著改變光波導免疫傳感器中諧振腔的折射率，提高檢測靈敏度。

1.一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒，其特征在于，包括A液和
B液，其中：
所述A液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液，所述A液中還包含
20～200nm的羧基化的磁珠；所述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨
基修飾的含有目標miRNA一半互補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上；
所述B液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液，所述B液中還包含
20～200nm的羧基化的微球；所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨
基修飾的含有目標miRNA另一半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上；
所述A液和B液中，Tris緩沖液的pH均為7.3。
2.一種用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA的試劑盒的操作方
法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將光波導免疫傳感器開啟，先通入A液，所述A液是包含0.1M氯化
鈉的0.1M?Tris緩沖液，所述A液中還包含20～200nm的羧基化的磁珠；所
述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA一半互
補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上；在光波導免疫傳感器的電磁場作用下，所
述羧基化的磁珠被吸附在光波導免疫傳感器的諧振腔外，產生基底光波導信
號；
2)隨后將待測樣品與B液等體積混合得到混合液，所述B液是包含0.1M
氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液，所述B液中還包含20～200nm的羧基化的微球；
所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA另一
半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上；將所述混合液通入光學通道，此時步
驟1)中吸附在諧振腔外的磁珠與混合液中的微球通過待測樣品中游離的
miRNA結合在一起，以此改變諧振腔的折射率，使諧振腔內的光波導信號發
生變化；
3)配制至少四個含不同濃度的游離miRNA標準液，每個標準液按步驟1)
和2)的操作方法得到兩個光波導信號值，以miRNA濃度為橫坐標，兩次光
波導信號值差值為縱坐標，繪制標準曲線；
4)將步驟1)和2)所得待測樣品的兩次光波導信號值差值與所述標準
曲線比對，定量檢測出待測樣品中游離miRNA的存在及其濃度。
3.根據權利要求2所述的用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA
的試劑盒的操作方法，其特征在于，所述A液和B液中，Tris緩沖液的pH
均為7.3。