本發(fā)明涉及一種葡萄糖脫氫酶突變體的篩選方法，屬于突變體篩選技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的篩選方法包括以下步驟：對葡萄糖脫氫酶基因進(jìn)行隨機(jī)突變，得到葡萄糖脫氫酶的突變文庫；將所述突變文庫中的基因構(gòu)建到pET28a?INP質(zhì)粒上，得到pET28a?INP?GDH質(zhì)粒，將所述pET28a?INP?GDH質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，得到基于冰核蛋白的細(xì)菌表面展示系統(tǒng)菌株；將所述基于冰核蛋白的細(xì)菌表面展示系統(tǒng)菌株涂布到藍(lán)白斑篩選培養(yǎng)基上，篩選顏色為白色的菌落為葡萄糖脫氫酶突變菌株。本發(fā)明提供的篩選方法簡單、快捷、實(shí)用，可以極大節(jié)省葡萄糖脫氫酶突變體的篩選時間。

1.一種葡萄糖脫氫酶突變體的篩選方法，包括以下步驟：對葡萄糖脫氫酶基因進(jìn)行隨機(jī)突變，得到葡萄糖脫氫酶的突變文庫；將所述突變文庫中的基因構(gòu)建到pET28a-INP質(zhì)粒上，得到pET28a-INP-GDH質(zhì)粒，將所述pET28a-INP-GDH質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，得到基于冰核蛋白的細(xì)菌表面展示系統(tǒng)菌株；將所述基于冰核蛋白的細(xì)菌表面展示系統(tǒng)菌株涂布到藍(lán)白斑篩選培養(yǎng)基上，篩選顏色為白色的菌落為葡萄糖脫氫酶突變菌株；所述藍(lán)白斑篩選培養(yǎng)基以自誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，包括0.05～0.15g/L氧化型染料，1mM單糖類底物，0.05mM輔酶NAD⁺或NADP⁺，0.05mM卡那霉素，0.05mM N-甲基吩嗪甲基硫酸鹽；所述氧化型染料包括亞甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)、中性紅、亮甲酚藍(lán)或氮藍(lán)四唑；所述單糖類底物包括葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、半乳糖；所述自誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括5～10g/L甘油，2～4g/L乳糖，10～15g/L瓊脂糖，10～15g/L蛋白水解產(chǎn)物N-Z-Amine AS，0.1～0.5g/L酵母粉，0.5～1.5g/L NaCl，2～5mM MgSO₄，25～40mM Na₂HPO₄，25～40mM KH₂PO₄，50～80mM NH₄Cl，5～8mM Na₂SO₄和體積分?jǐn)?shù)為0.1％的復(fù)合微量元素；所述復(fù)合微量元素包括50～80μM的Fe³⁺，20～50μM的Ca²⁺，10～30μM的Mn²⁺，10～30μM的Zn²⁺，2～5μM的Co²⁺，2～5μM的Cu²⁺，2～5μM的Ni²⁺，2～5μM的MoO₄^2-，2～5μM的SeO₃^2-和2～5μM的BO₃^3-。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述隨機(jī)突變采用的方法為易錯-PcR。