本發明公開了一種不對稱轉化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重組酵母菌，它是導入羰酰還原酶基因和葡萄糖脫氫酶基因的釀酒酵母菌。本發明還公開了上述重組酵母菌的構建方法。利用本發明重組酵母菌制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的方法為：以4-氯乙酰乙酸乙酯為底物，以葡萄糖為輔助底物，由本發明的重組酵母菌進行轉化反應制備得到(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯。本發明的重組酵母菌可在不添加任何輔酶的條件下，高效催化4-氯乙酰乙酸乙酯為(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯，光學純度e.e值大于98％，對底物的轉化率大于95％，降低了生產成本，比起其它無需外加昂貴輔酶的菌種，對底物的轉發率高，光學活性高。

1.一種不對稱轉化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重組酵母菌，其特征在于它是導
入羰酰還原酶PsCR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因的釀酒酵母菌；其中，所述的羰酰
還原酶PsCR基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.根據權利要求1所述的不對稱轉化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重組酵母菌，
其特征在于它的菌株保藏號為CCTCC?NO：M?208129。
3.構建權利要求1所述的重組酵母菌的方法，其特征在于該方法為：克隆羰酰還
原酶PsCR基因與葡萄糖脫氫酶GDH基因，將其構建在雙啟動子載體中并在釀酒酵母
中進行共表達，獲得不對稱轉化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重組酵母菌。
4.根據權利要求4所述的構建重組酵母菌的方法，其特征在于所述的雙啟動子載
體為PESC-LEU。
5.權利要求1所述的不對稱轉化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重組酵母菌在4-
氯乙酰乙酸乙酯不對稱還原制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應用。
6.一種生產(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的方法，其特征在于該方法以4-氯乙酰乙酸乙
酯為底物，以葡萄糖為輔助底物，由導入了羰酰還原酶PsCR基因和葡萄糖脫氫酶GDH
基因的權利要求1所述的釀酒酵母菌進行轉化反應制備得到(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯；
其中，底物4-氯乙酰乙酸乙酯的初始反應濃度為1～100g/L，葡萄糖的初始反應濃度
為100mM～3M，重組酵母菌的用量以濕酵母計為20～200g/L。
7.根據權利要求6所述的生產(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的方法，其特征在于所述的
反應溫度為20～35℃，反應時間為15～40h。
8.根據權利要求6所述的生產(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的方法，其特征在于所述的
轉化反應采用水相體系轉化法或有機溶劑/水雙相體系轉化法。
9.根據權利要求8所述的生產(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的方法，其特征在于所述的
水相體系轉化法為：濕重組酵母菌在pH?5～8的磷酸緩沖溶液中進行生物轉化；所述的
有機溶劑/水雙相體系轉化法為：濕重組酵母菌在含有pH?5～8的磷酸緩沖液/乙酸正丁酯
的雙相體系中進行生物轉化。