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一種葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-06
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201210065718.X 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)方法 
  • 項目單位 蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司
  • 發(fā)明人 陳令偉,周強強,武濤,劉毅 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 許子暢
  • 發(fā)布時間 2022-01-06  
  • 01

    項目簡介

    展開
  • 02

    說明書

    1.一種葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述生產(chǎn)方法是先構(gòu)建表達葡萄糖脫氫酶的重組大腸桿菌并將其接種至初始培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,發(fā)酵過程中通過流加補料技術(shù)向包含所述重組大腸桿菌的發(fā)酵液中添加補料培養(yǎng)基,當(dāng)發(fā)酵參數(shù)達到設(shè)定閾值時,再向發(fā)酵液中添加誘導(dǎo)劑,并繼續(xù)發(fā)酵一定時間至發(fā)酵結(jié)束,最后從發(fā)酵液的培養(yǎng)物中取得葡萄糖脫氫酶;其中,流加補料時,補料培養(yǎng)基的流加速度隨著發(fā)酵時間的延長而梯度遞增,至添加誘導(dǎo)劑后保持不變;????所述生產(chǎn)方法包括以下步驟:(1)、準(zhǔn)備階段:構(gòu)建基因工程菌,配制種子培養(yǎng)基、初始培養(yǎng)基和補料培養(yǎng)基;使基因工程菌在所述種子培養(yǎng)基中活化,然后將活化后得到的種子液接種到初始培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,按體積比,接種時種子液/初始培養(yǎng)基=1%~4%;所述基因工程菌為表達葡萄糖脫氫酶的重組大腸桿菌;所述種子培養(yǎng)基包括蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L和NaCl?10g/L,且pH值為7.0;所述初始培養(yǎng)基包括蛋白胨6~15g/L、酵母粉5~10g/L、甘油6~18g/L、硫酸鎂1~4g/L、磷酸鹽4~8g/L和氯化鈉5~12g/L;所述補料培養(yǎng)基包括蛋白胨、酵母粉和甘油,且按質(zhì)量計蛋白胨:酵母粉:甘油=2:1:14~15;(2)、發(fā)酵過程:當(dāng)發(fā)酵液中的細(xì)胞光密度隨著發(fā)酵的進行依次達到4、8、12、16、20時,通過流加補料技術(shù)分批向發(fā)酵液中補充補料培養(yǎng)基,且補料培養(yǎng)基的流加速度依次對應(yīng)為0~10g/L/h、10~20g/L/h、20~30g/L/h、30~40g/L/h、40~50g/L/h;當(dāng)細(xì)胞光密度>20時,向發(fā)酵液中添加誘導(dǎo)劑,且誘導(dǎo)劑在發(fā)酵液中的加入質(zhì)量占發(fā)酵液總量的0.01%~0.2%;然后在保持補料培養(yǎng)基的流加速度不變的情況下繼續(xù)發(fā)酵16~20小時;發(fā)酵過程中,發(fā)酵液的溶氧維持在30%~40%之間,發(fā)酵液pH值控制在6.8~7.3之間;添加誘導(dǎo)劑前,發(fā)酵溫度控制在37℃;添加誘導(dǎo)劑后的發(fā)酵溫度控制在28℃;(3)、從步驟(2)所得發(fā)酵液的培養(yǎng)物中取得葡萄糖脫氫酶。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄糖脫氫酶的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述誘導(dǎo)劑為異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。
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