本發(fā)明公開了一種采用自克隆工程菌發(fā)酵生產(chǎn)L-山梨糖的方法，屬于采用代謝工程調(diào)控策略優(yōu)化發(fā)酵過程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用代謝工程的手段，獲得自克隆氧化葡萄糖酸桿菌工程菌，以其為生產(chǎn)菌株，通過發(fā)酵工藝優(yōu)化使山梨醇脫氫酶的活性提高了1.33倍；以山梨醇為唯一碳源，發(fā)酵36h后，L-山梨糖產(chǎn)量達到225g/L，與出發(fā)菌株節(jié)相比將發(fā)酵時間縮短了12h。本發(fā)明通過調(diào)控山梨醇脫氫途徑，成功實現(xiàn)了山梨醇快速化地導(dǎo)向目標代謝產(chǎn)物山梨糖的目的。為今后利用代謝工程手段改造菌株促進目標產(chǎn)物過量積累提供了一定的借鑒意義。

1.一種采用自克隆工程菌發(fā)酵生產(chǎn)L-山梨糖的方法，其特征在于以氧化葡萄糖酸桿菌工程菌
為生產(chǎn)菌株，接種到種子培養(yǎng)基中，500mL搖瓶裝液50mL，于30°C、200rpm條件下培養(yǎng)
20-24h；按15%的接種量將培養(yǎng)好的種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基，30°C，200rpm條件下培養(yǎng)36h；
所述氧化葡萄糖酸桿菌工程菌過量表達外源山梨醇脫氫酶基因，其構(gòu)建方法為：通過化學(xué)全
合成方法獲得Genbank:NC_006677.1所示山梨醇脫氫酶基因，克隆到表達載體pBBR1MCS-2，
進一步轉(zhuǎn)化氧化葡萄糖酸桿菌獲得自克隆基因工程菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基組成為：山梨醇150g，酵母膏6g，
CaCO₃2g，pH4.8-5.1，自來水定容至1L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：山梨醇250g，酵母膏2g，
CaCO₃2g，pH4.8-5.1，自來水定容至1L。