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一種藍藻藻藍蛋白的富集分離方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-02
  • 技術(shù)成熟度:正在研發(fā)
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200910026902.1 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種藍藻藻藍蛋白的富集分離方法 
  • 項目單位 江南大學
  • 發(fā)明人 王峰,高瑾,崔正剛 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學藥品
  • 技術(shù)成熟度 正在研發(fā)
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 蔣昊庭
  • 發(fā)布時間 2022-01-02  
  • 01

    項目簡介

    一種藍藻藻藍蛋白的富集分離方法,屬于生化分離工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明步驟為:藍藻破壁液的制備;JDN-3型樹脂富集藍藻破壁液中的藻藍蛋白;洗脫分離藻藍蛋白;JDN-3型樹脂層析分離;洗脫液在脫鹽后進行冷凍干燥,獲得一定純度的藻藍蛋白;蛋白回收率最高可達85.5%。該方法簡單,對藍藻破壁液直接使用JDN-3型樹脂進行富集,不采用通常的硫酸銨鹽析、有機溶劑、等電點等方法,降低了制備過程中化學試劑使用量,簡化了純化過程的步驟,避免了產(chǎn)品損失,使用JDN-3型樹脂層析后所得的藻藍蛋白具有較高純度,純度達到A/A>2.2。原料采用鮮藻或干藻粉,甚至是野外的太湖水華藍藻,從而提供了一種解決藻類資源規(guī)模化利用的技術(shù)方法。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種藍藻藻藍蛋白的富集分離方法,其特征在于步驟為:藍藻破壁液的制備;JDN-3型樹脂富集藍藻破壁液中的藻藍蛋白;洗脫分離藻藍蛋白;JDN-3型樹脂層析分離;洗脫液在脫鹽后進行冷凍干燥,獲得一定純度的藻藍蛋白;(1)JDN-3型樹脂制備:在容器中,放入氯甲基化聚苯乙烯樹脂球即交聯(lián)度10%的氯球和有機溶劑,氯球與有機溶劑的重量比為1∶8~15,通入氮氣保護,分散溶脹2~12小時,在適當?shù)臄嚢柘拢尤攵嘁蚁┒喟罚嘁蚁┒喟放c氯球的重量比為2~12∶1,加入多乙烯多胺重量0.05%~0.1%的催化劑,加熱到70℃~90℃,攪拌反應(yīng)4~16小時,胺化后的樹脂用甲醇、四氫呋喃、去離子水依次洗滌至中性,用質(zhì)量濃度1%硝酸銀溶液檢測至洗滌后無氯離子存在,即得JDN-3型樹脂;所述有機溶劑選用N,N-二甲基甲酰胺、吡啶、1,4-二氧六環(huán)或四氫呋喃;所述催化劑選用二氯化錫、氧化鎂、三氯化鐵或氯化鈷;(2)藍藻破壁液的制備:采用水作提取劑,藻粉或鮮藻與水的固液質(zhì)量比為1∶1~1∶10,攪拌均勻后,置于-10℃~-20℃下冷凍一定時間后,37℃融解,如此反復(fù)凍融4-6次;融化后的藍藻破壁液4800-18000r/min離心10-30min,取上層清液;(3)JDN-3型樹脂富集藍藻破壁液中的藻藍蛋白:在容器中加入藍藻破壁液和JDN-3型樹脂,藍藻破壁液中蛋白質(zhì)濃度為10~35mg/mL,JDN-3型樹脂在藍藻破壁液中的重量體積百分濃度為5%~20%,密閉后,25~35℃下,在振蕩器上振蕩4~10小時,振蕩器轉(zhuǎn)速為100r/min,振蕩結(jié)束后,經(jīng)過抽濾,獲得飽和吸附藻藍蛋白的JDN-3型樹脂;(4)洗脫分離藻藍蛋白:將步驟2中獲得的飽和吸附藻藍蛋白的JDN-3型樹脂,用含0.1~0.5mol/L氯化鈉的0.005~0.5mol/L的磷酸緩沖液多次洗滌,收集含藻藍蛋白的洗脫液,透析脫鹽后,真空濃縮獲得濃縮液;(5)JDN-3型樹脂層析分離:采用濕法,將JDN-3型樹脂加到層析柱內(nèi),使之自然沉降,直至達到所需的高度為止,將多余的液體放出,使液面剛好與柱床表面一致,步驟3中獲得的濃縮液的加入量為床層體積的1/10;待濃縮液中的蛋白被完全吸附后,用含0.1~0.5mol/L氯化鈉的0.005~0.5mol/L的磷酸緩沖液梯度洗脫,控制流速在0.5~2mL/min,收集富含藻藍蛋白的洗脫液段;(6)透析脫鹽、冷凍干燥:將收集的藻藍蛋白洗脫液透析脫鹽,最后冷凍干燥,得到純度A620/A280>2.2的高純度藻藍蛋白粉末。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍藻藻藍蛋白的富集分離方法,其特征在于藍藻的種類為藍藻或螺旋藻干粉,或新鮮的螺旋藻,或取自野外的由多種微藻組成的太湖水水華藍藻。
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專利技術(shù)附圖

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