本發明公開的是1型和3型鴨甲肝病毒一步法雙重RT-PCR檢測試劑盒、引物對及方法，引物對1由引物1和引物2組成，用于檢測1型鴨甲肝病毒，它們的核苷酸序列分別依次為SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的單鏈DNA；引物對2由引物3和引物4組成，用于檢測3型鴨甲肝病毒，它們的核苷酸序列分別依次為SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的單鏈DNA。一次RT-PCR反應就能同時檢測1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝病毒兩種病原體的檢測技術，避免了常規PCR的重復檢測，具有低成本、高效率等優點，而且在引物設計上利用擴增片段長度的不同直接判定擴增結果，使得該方法在結果判定時更簡便、直觀和實用。

1.能夠檢測1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝病毒的兩個引物對，其特征
在于，引物對1由引物1和引物2組成，用于檢測1型鴨甲肝病毒，它們的核苷
酸序列分別依次為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的單鏈DNA；引物
對2由引物3和引物4組成，用于檢測3型鴨甲肝病毒，它們的核苷酸序列分別
依次為SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示的單鏈DNA。
2.1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝病毒一步法雙重RT-PCR檢測試劑盒，
其特征在于，在本試劑盒中包括彼此獨立分裝的以下各組分：

其中PrimeScript?1?Step?Enzyme?Mix由RTase、
HS、RNase?Inhibitor以及One?Step?RT-PCR用穩定劑配制，2×1Step?Buffer由
Buffer、dNTP以及One?Step?Enhancer?Solution配制，具體配比參照寶生物工程(大
連)有限公司的One?Step?RT-PCR?Kit?Ver.2(Dye?Plus)，上述劑量為
100次量。
3.應用權利要求2所述檢測試劑盒檢測1型鴨甲肝病毒和3型鴨甲肝
病毒的多重PCR檢測方法，其特征在于，用于非診斷性目的的檢測，引物1在
所述PCR試劑中的終濃度具體為0.2umol/L；引物2在所述PCR試劑中的終
濃度具體為0.2umol/L；引物3在所述PCR試劑中的終濃度具體為0.4umol/L；
引物4在所述PCR試劑中的終濃度具體為0.4umol/L；RT-PCR的反應條件為
50℃反轉錄30分鐘，94℃變性2分鐘；然后進入變性94℃30秒，45℃梯度退
火20秒，每循環一次升高2℃，72℃延伸2分鐘的循環，共進行8個循環；
然后進入變性94℃30秒，55℃退火20秒，72℃延伸2分鐘的循環，共進行
25個循環；最后再經72℃延伸10分鐘后，于4℃結束反應。