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一種快速?gòu)耐寥篮Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-15
  • 技術(shù)成熟度:可以量產(chǎn)
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201310202954.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種快速?gòu)耐寥篮Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法 
  • 項(xiàng)目單位 三峽大學(xué)
  • 發(fā)明人 陳國(guó)華,付桂榮,郭倩倩 
  • 行業(yè)類別 藥品-化學(xué)藥品
  • 技術(shù)成熟度 可以量產(chǎn)
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 楊培釗
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-15  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    一種快速?gòu)耐寥乐泻Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法,包括以下步驟:采集土壤樣本;培養(yǎng):樣本系列經(jīng)梯度稀釋后,接種于含有高氏一號(hào)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿里,培養(yǎng)6-12天;挑選單菌落:將形成的單菌落數(shù)量最多培養(yǎng)皿中所有的單菌落挑選出來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)接;長(zhǎng)方形轉(zhuǎn)接:所有單菌落編號(hào),轉(zhuǎn)接至新的高氏一號(hào)培養(yǎng)基上,劃短線轉(zhuǎn)接到新培養(yǎng)基中;篩選:用不銹鋼打孔器將生長(zhǎng)放線菌的培養(yǎng)基打成圓形的瓊脂快,用鑷子夾取瓊脂塊放置于預(yù)先涂布測(cè)試細(xì)菌的培養(yǎng)基上,培養(yǎng)18-24h,采用透明圈直徑D-瓊脂塊直徑d分析抗菌活性大小,將放線菌繼續(xù)分離培養(yǎng),得到穩(wěn)定性的抗菌素放線菌。本發(fā)明提供的從土壤中篩選產(chǎn)抗菌素放線菌的方法,具有操作方便、迅速的優(yōu)勢(shì),可替代單菌落瓊脂塊法、單菌落涂布瓊脂塊和單菌落液體發(fā)酵法而廣泛推廣使用。
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  • 02

    說(shuō)明書

    1.一種快速?gòu)耐寥乐泻Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法,其特征在于該方法包括以下步驟:1)土壤樣本的采集及處理:采集新鮮土壤,放入50mL滅菌塑料袋中,立即帶回實(shí)驗(yàn)室,稱取濕重樣品5g于80℃烘干恒重,計(jì)算出5g干重土樣所需濕重量;2)培養(yǎng):將步驟1)采集的相當(dāng)于干重5g的濕重樣本經(jīng)梯度稀釋液稀釋后在65℃水浴恒溫10min,接種于含有高氏一號(hào)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿里,培養(yǎng)7-12天,所述的梯度稀釋培養(yǎng)液的培養(yǎng)方法為,將相當(dāng)于干重5g的濕重樣本加入滅菌水中,充分混勻,得到10-1的稀釋液;取5mL10-1的稀釋液加入滅菌水中,充分混勻,得到10-2的稀釋液;取5mL10-2的稀釋液加入滅菌水中,充分混勻,得到10-3的稀釋液;3)挑選單菌落:將步驟2)中形成的單菌落數(shù)量最多的培養(yǎng)皿中所有的單菌落挑選出來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)接;4)長(zhǎng)方形轉(zhuǎn)接:將步驟3)所有單菌落編號(hào),用接種環(huán)轉(zhuǎn)接至新的高氏一號(hào)培養(yǎng)基上,劃短線轉(zhuǎn)接到新培養(yǎng)基中,在28℃培養(yǎng)7-12天,其中每個(gè)短線之間距離不少于7mm,每個(gè)10cm的培養(yǎng)皿至少轉(zhuǎn)接35個(gè)單菌落;5)篩選:用直徑為4mm的不銹鋼打孔器將生長(zhǎng)有放線菌的瓊脂培養(yǎng)基打成2塊圓形的瓊脂培養(yǎng)基塊,用鑷子分別夾取瓊脂塊放置于預(yù)先涂布測(cè)試的帶細(xì)菌的培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)18-24?h,觀察抗菌活性,產(chǎn)生透明圈的即為有抗菌活性,其中抗菌活性大小R?=?透明圈直徑D?-?瓊脂塊直徑d;6)將產(chǎn)生透明圈瓊脂塊的原始單菌落重復(fù)步驟4)、5)的轉(zhuǎn)接、篩選至少10次,進(jìn)行分離純化,得到產(chǎn)抗菌素的放線菌。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速?gòu)耐寥乐泻Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法,其特征在于:長(zhǎng)方形轉(zhuǎn)接中,劃短線的長(zhǎng)邊長(zhǎng)為8-10mm,寬為一個(gè)接種環(huán)劃線寬度。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速?gòu)耐寥乐泻Y選產(chǎn)抗菌素的放線菌的方法,其特征在于:一個(gè)原始單菌落通過長(zhǎng)方形轉(zhuǎn)接后直接測(cè)試兩類不同的細(xì)菌:革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。
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專利技術(shù)附圖

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