本發(fā)明涉及誘導(dǎo)型啟動(dòng)子在通過(guò)發(fā)酵產(chǎn)生乙醇酸中的用途。本發(fā)明涉及一種用于在發(fā)酵工藝中產(chǎn)生乙醇酸的方法，其包括下述步驟：?在包含碳源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的微生物，?在所述微生物中用外源刺激調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，和?從培養(yǎng)基回收乙醇酸，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，至少一種涉及乙醇酸產(chǎn)生的靶基因的表達(dá)處于異源誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的調(diào)控下，該啟動(dòng)子的活性受所述外源刺激的調(diào)節(jié)。本發(fā)明亦涉及用于乙醇酸產(chǎn)生方法中的經(jīng)修飾的微生物。

1.一種用于在發(fā)酵工藝中產(chǎn)生乙醇酸的方法，其包括下述步驟：
-在包含碳源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的屬于腸桿菌科的屬的微生物，
-在所述微生物中用外源刺激調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，其中所述外源刺激是溫度，和
-從培養(yǎng)基回收乙醇酸，
其中在所述微生物中，icd基因的表達(dá)處于異源誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的調(diào)控下，該啟動(dòng)子由溫
度誘導(dǎo)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述誘導(dǎo)型啟動(dòng)子選自：
-由噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子，
-由溫度敏感性Lac抑制物調(diào)節(jié)的經(jīng)修飾的lac啟動(dòng)子。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述由噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子選自下組：
啟動(dòng)子PR和啟動(dòng)子PL。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物是λ抑制物cI的溫度不穩(wěn)定
等位基因。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述λ抑制物cI的溫度不穩(wěn)定等位基因是λ抑制物等位基因
cI857。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，基因recA缺失。
7.權(quán)利要求1的方法，其中誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的使用允許icd基因在37℃至42℃表達(dá)，并在
28℃至32℃抑制icd基因的表達(dá)。
8.權(quán)利要求1的方法，其中在培養(yǎng)基中產(chǎn)生的乙醇酸的回收包括回收存在于培養(yǎng)基中
的乙醇酸的衍生物和前體。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述微生物來(lái)自大腸桿菌(Escherichia coli)菌種。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述微生物呈現(xiàn)下述遺傳修飾：
-基因aceB、gcl、glcDEFGB、aldA、iclR、edd、eda、poxB、ackA和pta的缺失，和
-基因ycdW的過(guò)表達(dá)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述微生物進(jìn)一步呈現(xiàn)基因aceK的缺失。
12.權(quán)利要求4或5的方法，其中所述微生物呈現(xiàn)下述遺傳修飾：
-基因aceB、gcl、glcDEFGB、aldA、iclR、edd、eda、poxB、ackA和pta的缺失，和
-基因ycdW的過(guò)表達(dá)。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述微生物進(jìn)一步呈現(xiàn)基因aceK的缺失。
14.一種經(jīng)修飾用于改善乙醇酸產(chǎn)生的且屬于腸桿菌科的屬的微生物，其中在所述經(jīng)
修飾的微生物中，icd基因的表達(dá)處于如權(quán)利要求1中所限定的異源誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的調(diào)控
下。
15.權(quán)利要求14的微生物，其中所述誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的使用允許icd基因在37℃至42℃表
達(dá)，并在28℃至32℃抑制icd基因的表達(dá)。
16.權(quán)利要求14或15的微生物，其中所述乙醇酸產(chǎn)生在30世代之后為起始產(chǎn)生量的至
少50％。
17.權(quán)利要求14的微生物，其中所述微生物來(lái)自大腸桿菌種。
18.權(quán)利要求14的微生物，其中所述誘導(dǎo)型啟動(dòng)子選自：
-由噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子，
-由溫度敏感性Lac抑制物調(diào)節(jié)的經(jīng)修飾的lac啟動(dòng)子。
19.權(quán)利要求18的微生物，其中所述由噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子選自下
組：?jiǎn)?dòng)子PR和啟動(dòng)子PL。
20.權(quán)利要求18的微生物，其中所述噬菌體λ的經(jīng)修飾的抑制物是λ抑制物cI的溫度不
穩(wěn)定等位基因。
21.權(quán)利要求20的微生物，其中所述λ抑制物cI的溫度不穩(wěn)定等位基因是λ抑制物等位
基因cI857。
22.權(quán)利要求14或18的微生物，其中所述微生物呈現(xiàn)下述遺傳修飾：
-基因aceB、gcl、glcDEFGB、aldA、iclR、edd、eda、poxB、ackA和pta的缺失，和
-基因ycdW的過(guò)表達(dá)。
23.權(quán)利要求22的微生物，其中所述微生物進(jìn)一步呈現(xiàn)基因aceK的缺失。