本發(fā)明公開了一種石斛蘭試管內(nèi)雜交育種方法。本發(fā)明采用試管內(nèi)雜交育種的方法能大大縮短果實的成熟期并在短時間內(nèi)使雜交后代在試管內(nèi)開花并進行花形花色觀察，培育出新品種，從而加快了石斛蘭的育種速度，在國際上屬于首次報道。同時由于試管內(nèi)石斛能周年開花，能進行自然界花期不遇品種間的雜交。另外，本發(fā)明各階段使用的培養(yǎng)基，其利用“花寶”為主要成分的培養(yǎng)基成份獨特，不但成本低，而且開花率高，果實發(fā)育快。并且實施本發(fā)明只需有簡單的植物組織培養(yǎng)設備即可進行，因此整個育種方法簡便，成本低，為培育高品質(zhì)的石斛蘭品種創(chuàng)造了條件。

1.一種石斛蘭試管內(nèi)雜交育種方法，其特征在于，包括以下步驟：
材料：開花時選取生長健壯的不同品種的石斛蘭母株進行人工授粉，待果實基本成熟時，
選擇果實中的種子用于無菌播種；
a、無菌播種：先將果實消毒后，用無菌水沖洗若干遍，再切開果實，用接種針將黃白色
粉末狀胚接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度
1500～2000lx，光照12～16小時/天，種子萌發(fā)，形成原球莖，直至形成2～3厘米高的完整
的小植株；
b、試管開花誘導和試管內(nèi)雜交育種：將2～3厘米高的完整的小植株轉(zhuǎn)到試管開花誘導培
養(yǎng)基上，培養(yǎng)直至開花，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16
小時/天，選取試管內(nèi)花色、花形正常的不同品種的石斛蘭花朵在無菌條件下進行相互間的
人工授粉，授粉后將帶花植株轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，
光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，直至果實成熟，
c、雜交組合的無菌播種和試管開花誘導：采取b步驟的試管內(nèi)的成熟果實，切開，將胚
在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上播種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光
照12～16小時/天，種子萌發(fā)形成原球莖，直至形成完整的小植株，再將小植株轉(zhuǎn)移到試管
開花誘導培養(yǎng)基上進行開花誘導培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，
光照12～16小時/天，試管內(nèi)開花后，觀察雜交組合的花形和花色；
d、新品種的組織培養(yǎng)：開花后選擇花形、花色優(yōu)良的株系進行組織培養(yǎng)，操作時以優(yōu)良
株系的莖尖或莖節(jié)為外植體，在原球莖誘導和繼代增殖培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條
件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，形成類原球莖，
將類原球莖轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基上進行生根壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～28℃，
光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，得到試管苗；
e、試管苗移栽：當試管苗能長至3～4厘米高時，轉(zhuǎn)移到自然光下進行煉苗，再移栽到基
質(zhì)中培養(yǎng)，得到石斛蘭雜交種苗；
所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為每升含有：花寶1號2～3克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100
亳升、蔗糖15～30克、含肌醇的MS培養(yǎng)基的維生素成分、活性炭0.5～1克，常量的瓊脂，
余量為水，pH?5.2～5.4；
所述的試管開花誘導培養(yǎng)基每升含有：花寶1號1～1.5克、花寶2號1～1.5克、水解酪
蛋白0.1～0.3克、6-芐基嘌呤0.5～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.5毫克、多效唑0.1～0.5毫克、蔗
糖30～40克、含肌醇的MS培養(yǎng)基的維生素成分，常量的瓊脂，余量為水，pH?5.2～5.4；
所述的生根壯苗培養(yǎng)基每升含有：花寶1號1～2克、花寶2號1～1.5克、蛋白胨0.5～2
克、蔗糖15～30克、含肌醇的MS培養(yǎng)基的維生素成分、萘乙酸0.1～0.5毫克、香蕉汁50～100
克、活性炭0.5～1克、常量的瓊脂，余量為水，pH?5.2～5.4；
所述的原球莖誘導和繼代增殖培養(yǎng)基每升含有：花寶1號1～2克，花寶2號1～1.5克、
蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖20～30克、含肌醇的MS培養(yǎng)基的維生素成分、
6-芐基嘌呤0.5～2.0毫克、常量的瓊脂，余量為水，pH?5.2～5.4。
2.根據(jù)權利要求1所述的石斛蘭試管內(nèi)雜交育種方法，其特征在于，所述的步驟a無菌播
種：先將果實消毒后，用無菌水沖洗若干遍，其為先將果實用體積分數(shù)75％的酒精浸泡
30秒后置于質(zhì)量分數(shù)0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水漂洗4～5次。
3.根據(jù)權利要求1所述的石斛蘭試管內(nèi)雜交育種方法，其特征在于，所述的步驟d的類原
球莖能再轉(zhuǎn)接到新的原球莖誘導和繼代增殖培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：
培養(yǎng)溫度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小時/天，形成類原球莖，類原
球莖再轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基上進行生根壯苗培養(yǎng)。
4.根據(jù)權利要求1所述的石斛蘭試管內(nèi)雜交育種方法，其特征在于，所述的試管苗移栽是
當試管苗能長至3～4厘米高時，每叢有2～3個芽時，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗10天，然后將
其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用泥炭和蘭石按體積比1：1比例混合的混合基
質(zhì)中栽培，常規(guī)條件下培養(yǎng)，得到石斛蘭雜交種苗。