1.一種誘導牙髓間充質干細胞分化為神經細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1、羊膜干細胞的提取及羊膜干細胞培養上清的收集；
步驟2、制備脫細胞羊膜基質；
步驟3、智齒的采集及運輸；
步驟4、將多聚賴氨酸及層粘連蛋白包被在培養皿底部；
步驟5、采用酶消化法提取牙髓間充質干細胞，接種于已包被的培養皿中，添加優化培
養基并置于低氧條件下原代培養；
步驟6、原代牙髓間充質干細胞匯合率達70%時傳代培養；
步驟7、對傳代牙髓間充質干細胞進行流式細胞表型分析；
步驟8、將傳代牙髓間充質干細胞接種于鋪有脫細胞羊膜基質的培養皿中；
步驟9、牙髓間充質干細胞在脫細胞羊膜基質上貼附24h后棄掉培養基，在牙髓間充質
干細胞上再覆蓋一層新的脫細胞羊膜基質；
步驟10、待牙髓間充質干細胞匯合率達90%時棄掉培養基，改用神經細胞誘導液繼續培
養2-3天；
步驟11、觀察到有60%的牙髓間充質干細胞被誘導為神經細胞時，棄掉神經細胞誘導
液，改用神經細胞維持液繼續培養神經細胞；
步驟12、對神經細胞進行免疫熒光法鑒定；
所述低氧條件為氧氣8%、二氧化碳5%、氮氣87%；
所述神經細胞誘導液為：含1%N2 supplement（N2添加劑）、15mM HEPES（4-羥乙基哌嗪
乙磺酸緩沖液）、15mM L-谷氨酰胺、20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、20ng/mL層粘連蛋白2、
20ng/mL層粘連蛋白8的無血清培養基；
所述神經細胞維持液為：含0.1mM NEAA（非必須氨基酸）、10ng/mLBDNF、10ng/mL NGF、
10ng/mL NT-3、15mM L-谷氨酰胺、10 ng/mL TGF、10ng/mL層粘連蛋白2、10ng/mL層粘連蛋
白8的DMEM培養基。
2.如權利要求1所述的誘導牙髓間充質干細胞分化為神經細胞的方法，其特征在于，所
述步驟4中多聚賴氨酸濃度為50μg/mL，層粘連蛋白濃度為20μg/mL。
3.如權利要求1所述的誘導牙髓間充質干細胞分化為神經細胞的方法，其特征在于，所
述步驟5酶消化法是指采用4mg/mL的中性蛋白酶和3mg/mL的I型膠原酶37℃條件下消化1h。
4.如權利要求1所述的誘導牙髓間充質干細胞分化為神經細胞的方法，其特征在于，所
述優化培養基為含10%羊膜干細胞培養上清和0.32mmol/L α-酮戊二酸的無血清培養基。
5.如權利要求1所述的誘導牙髓間充質干細胞分化為神經細胞的方法，其特征在于，所
述原代培養中半量換液時間為7天后，全量換液時間為10天后。
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