本發(fā)明提供了一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，將食用菌菌絲或子實體，在外加電磁場輔助下進(jìn)行種子液培養(yǎng)，然后將種子液菌體進(jìn)行固定化并使其帶有磁性，將固定化的菌體，在高壓脈沖電場的輔助下進(jìn)行深層發(fā)酵。通過本發(fā)明所得到的食用菌活性物質(zhì)具有以下優(yōu)點：食用菌有效成分提取充分，生產(chǎn)周期大大減少。固定化菌體可進(jìn)行多次發(fā)酵，磁性固定化菌體有利于產(chǎn)物的分離和純化，降低下游技術(shù)的負(fù)擔(dān)；改善了普通工藝提取食用菌活性物質(zhì)存在的周期長、有效成分利用率低、染菌多等問題，為后續(xù)多元化生產(chǎn)提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1.一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于,包括以下步驟：
A1：取食用菌菌絲或子實體，洗凈，干燥至水分含量為6~8%后，將其粉碎至100~120目獲
得粉末，將粉末與水按料液比1：（40~60）混合均勻，滅菌后得到種子料；
A2：取將A1所得種子料在無菌條件下按15~20%的接種量接種至滅菌后的種子液培養(yǎng)基
中，然后置于搖床上并通入電磁場培養(yǎng)24~96小時，培養(yǎng)溫度23~25℃，得種子液；
A3：將A2所得種子液離心獲得的沉淀物，在無菌條件下與磁性海藻酸鈉溶液混合均勻
得到混合液；將混合液通過注射器滴入氯化鈣溶液進(jìn)行固化20~30min，得到磁性載菌體海
藻酸鈣凝珠；將磁性海藻酸鈣凝珠用蒸餾水洗滌2~3次，然后與滅菌后的壁材溶液在無菌條
件下混合，200~230rpm轉(zhuǎn)速下振蕩15~30min進(jìn)行成膜反應(yīng)，得到磁性載菌體微膠囊；
所述的磁性海藻酸鈉溶液，是將磁性材料加入到20~25mg/ml海藻酸鈉溶液中混合均勻
制備而得；所述壁材溶液濃度為0.8~1.2mg/ml；所述的氯化鈣溶液濃度為18~22mg/ml；所述
混合液與氯化鈣溶液體積比為1：（1.5~2）；所述磁性海藻酸鈣凝珠與壁材溶液體積比為1：
（5~10）；
A4：將深層發(fā)酵培養(yǎng)基按發(fā)酵罐體積的60~80%加入發(fā)酵罐中，攪拌均勻后，將發(fā)酵罐封
好進(jìn)行滅菌；待深層發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻后，將F3所得磁性載菌體微膠囊按接種量為10~12%接
種至深層發(fā)酵培養(yǎng)基中得到深層發(fā)酵液；調(diào)節(jié)深層發(fā)酵液pH為5.2~6.2，控制深層發(fā)酵溫度
為22~25℃，無菌空氣通氣量為2.0~2.2m³/min，攪拌速度50~100r/min，罐壓38~45kPa，并通
入高壓脈沖電場進(jìn)行深層發(fā)酵，發(fā)酵72~168小時后，排出深層發(fā)酵醪液；
所述深層發(fā)酵培養(yǎng)基含有以下重量百分比的組分：碳源3~5%、氮源0.15~0.3%、大豆分
離蛋白3~5%、礦物質(zhì)鹽0.6~0.9%、促進(jìn)劑1~1.8%、生長因子2~4%、組合氨基酸Ⅰ0.5~0.7%；所
述的組合氨基酸Ⅰ為谷氨酸與甘氨酸1:1組合；
所述碳源為葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、玉米粉、山芋粉、豆粕、可溶性淀粉中的一種或
一種以上組合；
所述氮源為蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、酵母膏、黃豆餅粉、玉米粉、硫酸銨、硝酸鉀中一種
或一種以上組合；
所述的礦物質(zhì)鹽為硫酸亞鐵、氯化鈉、硫酸鎂、氯化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸
鋅、氯化鋅中的一種或一種以上組合；
所述促進(jìn)劑為橄欖油、中藥提取物、茶葉提取物、垂盆草、板藍(lán)根中的一種或一種以上
組合；
所述生長因子為蜂花粉、玉米粉、山茶油、枸杞粉中一種或一種以上組合；
A5：將A4所得發(fā)酵醪液，過濾后，即可得到含有食用菌活性物質(zhì)的溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A1所用食用菌為銀耳、靈芝、冬蟲夏草、香菇、松乳菇、猴頭菇、金針菇、茯苓中一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A1所述種子液培養(yǎng)基pH為5~7，含有以下重量分?jǐn)?shù)比的組分：葡萄糖30~40份、蛋白胨15~25
份，促進(jìn)劑0.1~0.3份，KH₂PO₄0.8~1.2份，MgSO₄?7H₂O0.5~1份，組合氨基酸Ⅱ0.9~1.1份；所
述促進(jìn)劑為酵母粉、VB₂、VB₆、橄欖油、茶葉提取物、蠶蛹粉中一種或一種以上組合；所述組合
氨基酸Ⅱ為先加入谷氨酸和甘氨酸1:1組合0.5~0.6份，再加入甘氨酸和絲氨酸1:1組合0.4
~0.5份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A1所述電磁場強度為10~20mT，作用時間5~20min/h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A3所述的磁性材料為分析純等級的四氧化三鐵，在磁性海藻酸鈉溶液中含量為0.004~
0.006g/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
F3所述壁材溶液制備方法如下：取分子量4~6萬的殼聚糖溶于體積比為1%醋酸溶液中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
所述磁性載菌體微膠囊的制備，制得的磁性載菌體微膠囊直徑為300~450μm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A4所述的高壓脈沖電場設(shè)置于發(fā)酵罐體中，電場頻率為40~60Hz，脈寬20~60μs，電場強度20
~50v/m，電場作用時間為20~40min。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)深層發(fā)酵提取食用菌活性物質(zhì)的方法，其特征在于：
A4排出發(fā)酵醪液的方法為利用可調(diào)節(jié)電磁場將磁性載菌體微膠囊定向吸引至發(fā)酵罐罐壁
上，菌液分離后，排出發(fā)酵醪液；可調(diào)節(jié)電磁場設(shè)置于發(fā)酵罐外壁，磁場強度50~100mT，作用
時間20~30min。