本發明提供了一種膽堿類似物以及由染料分子標記的四嗪探針。本發明提供的膽堿類似物與由染料分子標記的四嗪探針之間的偶聯反應在常溫、生理環境中就能快速發生，且無需銅催化，避免了金屬催化對細胞及活體的毒性影響；本發明提供的膽堿類似物與由染料分子標記的四嗪探針之間的偶聯反應后，通過檢測所述標記的染料分子可快速、高靈敏高分辨率地對細胞膜上的膽堿類似物進行定位和示蹤。本發明還提供了一種膽堿類似物以及由染料分子標記的四嗪探針的制備方法，該方法簡單易行，可以進行大規模生產，且生產成本低。本發明還提供了一種膽堿類似物以及由染料分子標記的四嗪探針的應用。

1.一種膽堿類似物，其特征在于，結構式如P1所示：

式中，k為2～4的自然數。
2.一種膽堿類似物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S10、提供如下結構式表示的化合物A和化合物B：

在催化劑存在的條件下，將所述化合物A和化合物B按1:1～1.5的摩
爾比溶于第一有機溶劑中，得到反應液，所述反應液在20～30℃下反應0.5～1
小時后，經萃取、干燥、硅膠柱層析分離純化得到化合物C，其結構式如
C所示：

S20、提供如下結構式表示的化合物D：

式中，k為2～4的自然數，
在催化劑存在的條件下，將所述化合物C和化合物D按1:2～5的摩
爾比溶于第二有機溶劑中，得到反應液，所述反應液在20～30℃下反應0.5～1
小時后，經萃取、干燥、硅膠柱層析分離純化得到化合物E，其結構式如E
所示：

式中，k為2～4的自然數；
S30、將所述化合物E和二甲基乙醇胺按1:1～3的摩爾比溶于第三有
機溶劑中，得到反應液，所述反應液在回流狀態下反應12～16小時后，經
濃縮、硅膠柱層析分離純化得到化合物P1，其結構式如P1所示：

式中，k為2～4的自然數。
3.如權利要求2所述的膽堿類似物的制備方法，其特征在于，所述
步驟S10中，所述催化劑為吡啶，所述催化劑的摩爾濃度為所述化合物A的
2～4倍；所述步驟S20中，所述催化劑為三乙胺或N，N-二異丙基乙胺，所
述催化劑的摩爾濃度為所述化合物C的2～5倍。
4.如權利要求2所述的膽堿類似物的制備方法，其特征在于，所述
第一有機溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、氯仿或N，N-二甲基甲酰胺；所述第
二有機溶劑為N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或四氫呋喃；所述第三有機溶
劑為N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或四氫呋喃。
5.如權利要求1所述的膽堿類似物在制備細胞原位檢測試劑盒中的
應用。
6.一種細胞原位檢測化合物，其特征在于，所述細胞原位檢測化合
物為如權利要求1所述的膽堿類似物和一種由染料分子標記的四嗪探針進行
偶聯反應后得到的化合物，所述染料分子標記的四嗪探針包括染料分子和四
嗪分子，所述染料分子與四嗪分子的氨基形成共價鍵，所述染料分子與四嗪
分子通過所述共價鍵相連，所述染料分子為熒光染料分子或近紅外染料分子，
所述四嗪分子的結構式如P2所示：

其中，R₂為
R₃為H或在所述中，X為CH或N。