本發明提供一種基因芯片的金沉積檢測方法，其特征在于所述方法包括將已知的DNA序列點樣到微陣列上制備基因芯片，在待測核酸的5’端預先修飾一種生物大分子，以及在納米金上標記與待測核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子構建納米金復合探針，然后將修飾好的待測核酸和標記好的所述納米金復合探針與所述基因芯片混合，孵育，洗去未反應的所述納米金復合探針，加入雙氧水金增強反應液觀察。本發明提供的基因芯片的金沉積檢測方法最大的特點及優點為：靈敏度高，檢測方便，操作簡便，耗時短，成本低，目視化檢測，檢測及信號讀取設備依賴程度低。

1.一種基因芯片的金沉積檢測方法，所述的方法包括將已知的DNA序
列點樣到微陣列上制備基因芯片，在待測核酸的5’端預先修飾一種生物大分
子，以及在納米金上標記與待測核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子構建
納米金復合探針，然后將修飾好的待測核酸和標記好的所述納米金復合探針
與所述基因芯片混合，孵育，洗去未反應的所述納米金復合探針，加入雙氧
水金增強反應液觀察，其特征在于，具體的檢測步驟為：
①采用芯片點樣儀將5’端氨基修飾的DNA探針點陣于醛基化修飾芯片表
面制備基因芯片，置于密閉空間固定，所述DNA探針序列為：
分枝桿菌通用探針：5’-NH₂-ggactgagatacggcc-3’；
結核分枝桿菌探針：5’-NH₂-cacgggatgcatgtct-3’；
龜分枝桿菌探針：5’-NH₂-ccacacacttcatggtga-3’；
胞內分枝桿菌探針：5’-NH₂-gacctttaggcgcatg-3’；
②PCR擴增獲得標記有生物素的DNA分子，其中，引物的序列為：
16s1：5’-Biotin-gataagcytgggaaactg-3’,其中y代表c/t；
16s2：5’-Biotin-tgcctcccgtaggagtctgg-3’；
③通過K₂CO₃將納米金溶液調pH值至6，加入鏈親和素溶液，混勻，再加
入聚乙二醇溶液，離心，洗去未標記上的鏈親和素，制得標記有鏈親合素的納
米金復合探針；
④取所述步驟②中制備的經過標記的DNA分子，滴于所述步驟①中制備的
基因芯片的點樣區，雜交，洗去未雜交的DNA分子，然后將所述步驟③中制備
的標記好的納米金復合探針滴于芯片點樣區，反應30～60min，洗液清洗去除未
反應的納米金復合探針；
⑤將雙氧水金增強反應液滴在點陣區，室溫靜置，肉眼或顯微鏡下觀察
；所述的雙氧水金增強反應液的組成為次氯金酸1～100mM、雙氧水0.5～4M
和質量百分數為1～10％的明膠。
2.根據權利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，所述步驟③中
還包括采用納米金重懸液重懸標記有鏈親合素的納米金復合探針，所述納米
金重懸液的組成為：牛血清白蛋白0.25～10％、聚乙烯吡咯酮0.1～1％、蔗糖
1.5～10％、聚乙二醇0.01～1％、吐溫0.2～1％，以上組成均為質量百分數。
3.根據權利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，所述雙氧水金
增強反應液的組成為：次氯金酸10mM、雙氧水1.5M和質量百分數為4％的
明膠。
4.根據權利要求1所述的金沉積檢測方法，其特征在于，納米金上標記
核酸序列時，所述核酸序列為兩種長度的DNA探針GP1和GP2，且GP1的
堿基長度比GP2長10個堿基以上。
5.根據權利要求4所述的金沉積檢測方法，其特征在于，當納米金的尺
寸為5～40nm時，GP1與GP2的比例在1∶4～1∶30之間。