1.一種用于檢測肺炎支原體耐藥突變的特異性引物及cycling探針，其特征在于，引物序列為：上游引物5’-CTGAAGCCCCAGTGAACGG-3’下游引物5’-ATTAGAACAGCACACAACCAAG-3’；特異性cycling探針序列分別為：FAM熒光標記的無突變敏感株檢測探針：5’-(Eclipse)GACGGAaAGAC(FAM)-3’HEX熒光標記的2063位突變耐藥株探針：5’-(Eclipse)GACGGGaAGAC(HEX)-3’ROX熒光標記的2064位突變耐藥株探針：5’-(Eclipse)GACGGAgAGAC(ROX)-3’其中，粗體小寫字母為cycling探針引入的RNA堿基；所述特異性引物及探針可應用于如下步驟的檢測肺炎支原體耐藥突變的方法：1)在肺炎支原體23S?rRNA基因2063位/2064位堿基上下游序列中尋找針對肺炎支原體的特異性引物，引物序列為：?上游引物5’-CTGAAGCCCCAGTGAACGG-3’?下游引物5’-ATTAGAACAGCACACAACCAAG-3’;??2)根據肺炎支原體無突變敏感株及突變耐藥株23S?rRNA基因2063位/2064位的堿基差異，分別設計針對無突變敏感株、2063位突變耐藥株及2064位突變耐藥株的特異性cycling探針；?所述特異性cycling探針及其序列分別為：?FAM熒光標記的無突變敏感株檢測探針：5’-(Eclipse)GACGGAaAGAC(FAM)-3’?HEX熒光標記的2063位突變耐藥株探針：5’-(Eclipse)GACGGGaAGAC(HEX)-3’?ROX熒光標記的2064位突變耐藥株探針：5’-(Eclipse)GACGGAgAGAC(ROX)-3’3)采用肺炎支原體特異性引物進行PCR擴增，通過Real-time?PCR擴增儀實時讀取熒光強度變化，確定被檢樣品中的序列的突變類型。2.按權利要求1所述的特異性引物及cycling探針，其特征在于，不同熒光基團標記的相應探針與PCR擴增產物完全匹配雜交，并被Rnase?H切斷釋放特定熒光，通過Real-time?PCR擴增儀實時讀取其熒光強度變化。3.?按權利要求2所述的特異性引物及cycling探針，其特征在于，所述的HEX標記的探針與PCR產物雜交并被Rnase?H切斷釋放HEX熒光，而其它探針不與PCR產物完全匹配雜交，不被RnaseH切斷釋放熒光，隨PCR循環數增加，產物累積致使HEX熒光強度增強,生成HEX熒光強度逐漸上升的擴增曲線,無2063位突變的則維持在水平的基線附近。4.按權利要求2所述的特異性引物及cycling探針，其特征在于，所述的FAM標記的探針與PCR產物雜交并被Rnase?H切斷釋放FAM熒光，而其它探針不與PCR產物完全匹配雜交，不被RnaseH切斷釋放熒光，隨PCR循環數增加，產物累積致使FAM熒光強度增強,生成FAM熒光強度逐漸上升的擴增曲線,無突變的則維持在水平的基線附近。5.按權利要求2所述的特異性引物及cycling探針，其特征在于，所述的ROX熒光標記的探針與PCR產物雜交并被Rnase?H切斷釋放FAM熒光，而其它探針不與PCR產物完全匹配雜交，不被Rnase?H切斷釋放熒光，隨PCR循環數增加，產物累積致使ROX熒光強度增強,生成ROX熒光強度逐漸上升的擴增曲線,無2064位突變的則維持在水平的基線附近。
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