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一種L-蘇氨酸醛縮酶及其在對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-24
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201910838613.5 
  • 技術(專利)名稱 一種L-蘇氨酸醛縮酶及其在對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用 
  • 項目單位 福建昌生生物科技發展有限公司
  • 發明人 林娟,王力超,許煉,陳承滔,賴凌燕 
  • 行業類別 醫藥制造-生物藥品
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢麗琴
  • 發布時間 2021-12-24  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種L?蘇氨酸醛縮酶,具有將對甲砜基苯甲醛和甘氨酸不對稱催化合成(2S,3R)?對甲砜基苯絲氨酸的活性,L?蘇氨酸醛縮酶選擇自下組中任意一種:(1)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽;(2)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列≥80%同源性的多肽;(3)將SEQ ID NO:1所示氨基酸序列經過1?5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的且保留催化活性的衍生多肽。本發明還提供L?蘇氨酸醛縮酶在對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用,挖掘篩選到來源于Actinocorallia herbida的L?蘇氨酸醛縮酶基因,采用基因工程技術表達重組大腸桿菌來源的L?蘇氨酸醛縮酶,以對甲砜基苯甲醛和甘氨酸為原料,采用全細胞催化的方法,不對稱催化合成(2S,3R)?對甲砜基苯絲氨酸,反應條件溫和、對環境友好。
    展開
  • 02

    說明書

    1.L-蘇氨酸醛縮酶在(2S, 3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用,其特征在于:L-蘇氨酸醛縮酶的編碼基因的核心序列如SEQID NO:2所示;通過基因工程構建含L-蘇氨酸醛縮酶的編碼基因的重組大腸桿菌細胞為L-蘇氨酸醛縮酶全細胞;將L-蘇氨酸醛縮酶全細胞作為催化劑用于(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸不對稱合成反應,所述合成反應的體系包括:對甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛、30%乙腈(v/v)的PBS緩沖液、以及L-蘇氨酸醛縮酶全細胞;各原料的質量摩爾濃度之比為對甲砜基苯甲醛∶甘氨酸∶磷酸吡哆醛=1-1.5∶2-3∶0.0001-0.0002,重組大腸桿菌全細胞濃度為10-13mg/mL;25℃-35℃下反應4-12h。2.根據權利要求1所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用,其特征在于,所述L-蘇氨酸醛縮酶全細胞的制備方法包括:S1、構建包含所述L-蘇氨酸醛縮酶編碼基因序列的重組表達質粒載體;S2、將步驟S1中的重組表達質粒載體轉化至大腸桿菌的感受態細胞中,并培養過夜;S3、收集步驟S2中培養后的大腸桿菌菌體,即獲得所述的L-蘇氨酸醛縮酶全細胞。3.根據權利要求2所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用,其特征在于,所述(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸不對稱催化合成反應體系的配置方法為:在反應容器中先加入磷酸鹽緩沖液,然后分別稱取對甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛并依次投入反應瓶中,充分混勻后,再加入重組大腸桿菌的全細胞,振蕩反應。4.根據權利要求3所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用,其特征在于,所述L-蘇氨酸醛縮酶不對稱催化合成(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸的反應體系達到預定的反應時間后,將反應液在8000-10000rpm離心3-6min,除去細胞沉淀,收集的上清液即為含有(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸的催化產物。
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專利技術附圖

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