本發明提供一種以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方法，屬于微生物油脂制備技術領域。該方法利用生物柴油副產物粗甘油為碳源，粘紅酵母32489為產油微生物制備微生物油脂，解決了葡萄糖或純甘油（AR）作為碳源制備微生物油脂成本較高的問題，也使粗甘油得到有效利用；生成的微生物油脂和植物油的成分幾乎一致。與植物油相比，微生物油脂具有制備周期短，不需占用耕地等優勢，是制備生物柴油的非糧生物質廉價原料，可降低生物柴油制備成本，具有較大的應用前景。

1.一種以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方法，其特征在于 ：該方法
具體步驟如下 ： （1）將活化好的粘紅酵母放入滅菌后的葡萄糖接種培養基中，在搖床中培
養 24 小時 ；所述步驟（1）中的葡萄糖接種培養基的pH為5.8-6.0，葡萄糖接種培養基滅菌
的 溫度為 121℃，滅菌時間為 30min，搖床培養時，搖床的轉速為 180-220r/min；
（2）將步驟（1）中培養好的接種液按一定比例加入到滅菌后的粗甘油發酵培養基中，在
搖床中培養數天 ；
（3）將步驟（2）中發酵后得到的粘紅酵母放在離心機中，在一定的轉速下離心，取下層
細菌放入烘箱中，在一定溫度下烘干至恒重 ；
（4）將步驟（3）中得到的烘干后的粘紅酵母放入離心管中，加入一定量的鹽酸，置于振
蕩器混勻后在室溫放置一段時間，再在沸水浴中煮一定時間，然后放入 -20℃的冰箱速冷
將 粘紅酵母菌體破碎 ；
（5）將步驟（4）中破碎后的菌液中加入 2 倍體積的氯仿 - 甲醇溶液，震蕩混勻，放入
離 心機中在一定轉速下離心，取下層氯仿溶液轉移至蒸餾瓶中，用旋轉蒸發器揮發出氯仿
層， 得到最終產品微生物油脂；其中，所述粗甘油發酵培養基的組成為 ：粗甘油 40g/L，
（NH₄）₂SO₄5g/L， KH₂PO₄1g/L，酵母浸粉 0.5g/L，MgSO₄0.5g/L ；其中，粗甘油是以 NaOH、對
甲苯磺酸或者離子 交換樹脂作為催化劑，餐飲廢油和混合甲乙醇制備生物柴油后剩余的
混合液，混合液成分為 ：甘油40%，甲醇22%，乙醇13%，水20%，脂肪酸鈉2%，脂肪酸酯2%，NaCl
1%；所述粘紅酵母為粘紅酵母 32489，購自中國工業微生物菌種保藏管理中心。
2.根據權利要求 1所述的以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方 法，
其特征在于 ：所述葡萄糖接種培養基的組成為 ：葡萄糖 20g/L，（NH₄）₂ SO₄5g/L，KH₂PO₄1g/
L， 酵母浸粉 0.5g/L，MgSO₄0.5g/L。
3.根據權利要求 1 所述的以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方法，
其 特征在于 ：所述步驟（2）中接種液按 5%-10% 的比例加入到滅菌后的粗甘油發酵培養
基中， 在搖床中培養 6-12 天，粗甘油發酵培養基的 pH 為 5.8-6.0，滅菌溫度為 121℃，
滅菌時間為30min，搖床轉速為 180r-220r/min。
4.根據權利要求 1 所述的以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方法，
其 特征在于 ：所述步驟（3）中離心機的轉速為 4000r/min，離心時間為 30min，烘箱中烘
干溫度 為 45-65℃。
5.根據權利要求 1 所述的以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制備方法，
其特征在于 ：所述步驟（4）中，每克干菌體加入 4mol/L 的鹽酸 6-10ml，室溫放置時間為
20-30min，在沸水浴中煮 3-5min，放入冰箱速冷 30-40min。
6. 根據權利要求 1 所述的以生物柴油副產物粗甘油為碳源的微生物油脂制制備方
法，其特征在于 ：所述步驟（5）中離心機的轉速為 4000r/min，離心時間為 25-30min。