本發(fā)明公開了一種灰樹花菌絲體抗腫瘤糖蛋白及制備方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。該糖蛋白是以深層發(fā)酵的灰樹花菌絲體為原料，并經(jīng)勻漿破碎、冷水浸提、離心、取上清液、硫酸銨沉淀、透析、DEAE-Sepharose？Fast？Flow和Superdex75？prep？grad柱層析等步驟系統(tǒng)分離純化獲得的。該糖蛋白是多糖和蛋白質(zhì)的復合物，其中多糖含量為2～10%，由阿拉伯糖、果糖、甘露糖和葡萄糖等4種單糖組成；蛋白質(zhì)含量為30～90%，由天冬氨酸、蛋氨酸和谷氨酸等17種氨基酸組成；其分子量范圍為30～90KDa。該糖蛋白對人胃癌細胞SGC-7901和人乳腺癌細胞MCF-7的生長有抑制作用，可用于制備可能的抗癌藥物。同時本發(fā)明能普遍適用于各種藥食用真菌深層發(fā)酵所得菌絲體中糖蛋白的分離純化。

1.一種具有抗腫瘤活性的灰樹花菌絲體糖蛋白的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：（1）將馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基斜面保存的灰樹花（Grifolafrondosa）菌種活化，切割成小塊接種到種子培養(yǎng)基中25℃，150r/min條件下培養(yǎng)6d后收集種子液，接種于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵10天，8000r/min離心后獲得灰樹花菌絲體；所得菌絲體的產(chǎn)率為30g/L；（2）將灰樹花菌絲體加入1~4倍體積的水后勻漿破碎，4~20℃浸提，離心，棄沉淀，取上清液,上清液濃縮后加入硫酸銨至飽和度為60～90％，靜置24~48h，高速離心取沉淀，加少量水復溶沉淀,將沉淀復溶液置入8000~14000Da的透析袋，去離子水透析，收集透析液后濃縮，進行DEAE-SepharoseFastFlow柱層析，依次用蒸餾水和0.1，0.3，0.5mol/LNaCl溶液為洗脫液進行階段式洗脫，收集0.3mol/LNaCl溶液洗脫的糖蛋白復合物D2組分，濃縮后進行Superdex^TM75prepgrad柱層析，用蒸餾水洗脫，收集S1組分，冷凍干燥S1組分即得到灰樹花菌絲體糖蛋白；該糖蛋白中多糖含量為2～10%，由阿拉伯糖，果糖，甘露糖和葡萄糖4種單糖組成；蛋白質(zhì)含量為30～90%，由天冬氨酸、蛋氨酸和谷氨酸等17種氨基酸組成；其分子量范圍為30～90KDa；步驟（1）中馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基組成如下：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L；種子培養(yǎng)基組成如下：葡萄糖20g/L，蛋白胨2g/L，KH₂PO₄2g/L，MgSO₄·7H₂O1g/L，玉米漿15g/L。