本發(fā)明公開了屬于醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)領(lǐng)域的一種利用甲基化原理檢測(cè)血液中轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞的試劑盒、標(biāo)志物及其檢測(cè)方法。該標(biāo)志物為肝癌細(xì)胞特異性表達(dá)降低的基因ASS基因或ASL基因，其啟動(dòng)子區(qū)和第一外顯子區(qū)包含至少一個(gè)被甲基化的CpG島。該試劑盒包括針對(duì)ASS基因和ASL基因的各5條特異性專用引物，通過甲基化特異性PCR方法檢測(cè)ASS基因和ASL基因甲基化情況，進(jìn)而推測(cè)待檢樣品中是否含有轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞。該方法具有專一性強(qiáng)，反應(yīng)靈敏的特點(diǎn)，對(duì)于了解并掌握如何早期發(fā)現(xiàn)肝癌意義重大。

1.一種利用甲基化原理檢測(cè)血液中轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞的試劑盒，包括dNTP、10
x?PCR?buffer、MgCl₂、ddH₂O，其特征在于，還包括標(biāo)準(zhǔn)血液DNA、熱啟動(dòng)Taq?DNA
聚合酶、引物F1、引物B1、引物F2、引物B2、引物B3、引物R1、引物L(fēng)1、引
物R2、引物L(fēng)2、引物L(fēng)3；上述引物用于做甲基化特異性PCR，PCR時(shí)，引物的配
對(duì)方案為：
引物F1、B1配對(duì)，引物F1、B2配對(duì)，引物F2、B1配對(duì)，引物F2、B3配
對(duì)，用于檢測(cè)精氨酸代琥珀酸合成酶基因甲基化情況；
引物R1、L1配對(duì)，引物R1、L2配對(duì)，引物R2、L3配對(duì)，用于檢測(cè)ASL
精氨酸代琥珀酸裂解酶基因甲基化情況；
所述標(biāo)準(zhǔn)血液DNA為取自無肝癌健康人血液提取的基因組DNA并經(jīng)過重
亞硫酸鹽處理；
所述引物F1為序列表中SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列，引物B1為序列表中
SEQ?ID?No.7所示的核苷酸序列，引物F2為序列表中SEQ?ID?No.8所示的核苷酸
序列，引物B2為序列表中SEQ?ID?No.9所示的核苷酸序列，引物B3為序列表中SEQ?
ID?No.10所示的核苷酸序列，引物R1為序列表中SEQ?ID?No.11所示的核苷酸序
列，引物L(fēng)1為序列表中SEQ?ID?No.12所示的核苷酸序列，引物R2為序列表中SEQ?
ID?No.13所示的核苷酸序列，引物L(fēng)2為序列表中SEQ?ID?No.14所示的核苷酸序
列，引物L(fēng)3為序列表中SEQ?ID?No.15所示的核苷酸序列。
2.一種利用甲基化原理檢測(cè)血液中轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞的標(biāo)志物，其特征在于，
所述標(biāo)志物衍生于肝癌特異性低調(diào)控基因精氨酸代琥珀酸合成酶基因和精氨酸
代琥珀酸裂解酶基因的甲基化的第一外顯子和啟動(dòng)子區(qū)域；所述精氨酸代琥珀酸
合成酶基因甲基化的第一外顯子和啟動(dòng)子區(qū)域核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No.
1所示，其中標(biāo)志物為一個(gè)或多個(gè)甲基化的CpG島并由SEQ?ID?No.3表示；所述精
氨酸代琥珀酸裂解酶基因的甲基化的第一外顯子和啟動(dòng)子區(qū)域核苷酸序列如序
列表中SEQ?ID?No.2所示，其中標(biāo)志物為一個(gè)或多個(gè)甲基化的CpG島并由SEQ?ID?
No.4或SEQ?ID?No.5表示。