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一種復合誘導培養基以及采用該培養基誘導臍帶間充質干細胞成神經元樣細胞的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-20
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710074106.X 
  • 技術(專利)名稱 一種復合誘導培養基以及采用該培養基誘導臍帶間充質干細胞成神經元樣細胞的方法 
  • 項目單位 鄭州大學
  • 發明人 關方霞,馬珊珊,邢衢,王欣欣,黃團結,孟楠,楊波 
  • 行業類別 醫藥制造-生物藥品
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓希
  • 發布時間 2022-02-20  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種復合誘導培養基,包括DA、DB、DC三種分化培養液,采用該復合誘導培養基誘導臍帶間充質干細胞成神經元樣細胞的方法是:首先采用DA分化培養液對臍帶間充質干細胞預誘導2天;然后采用DB分化培養液分化誘導1天;最后采用DC分化培養液維持誘導1天;觀察誘導后的神經元樣細胞形態特征,檢測誘導后神經分化相關基因mRNA水平,檢測誘導神經元樣細胞神經元遷移蛋白DCX、神經元特異性烯醇化酶NSE表達情況:DCX表達陽性者為神經前體細胞,NSE表達陽性者為神經元樣細胞。本發明將誘導過程分為三階段,每階段誘導時采用不同的培養基,誘導時間短,誘導效率高,誘導分化的神經元樣細胞存活穩定,移植后無排斥。
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  • 02

    說明書

    1.一種采用復合誘導培養基誘導臍帶間充質干細胞成神經元樣細胞的方法,其特征在于:首先將臍帶間充質干細胞分離、培養,當匯聚度達到50%時,經胰酶消化、離心收集細胞;并用DMEM-LG培養基制備成細胞懸液后,調整細胞密度至2×105 ml-1;然后接種、恒溫培養至臍帶間充質干細胞至60%時,按三個階段進行分化誘導:首先采用DA分化培養液對臍帶間充質干細胞預誘導2天;然后采用DB分化培養液分化誘導1天;最后采用DC分化培養液維持誘導1天;觀察誘導后的神經元樣細胞形態特征,檢測誘導后神經分化相關基因mRNA水平,檢測誘導神經元樣細胞神經元遷移蛋白DCX、神經元特異性烯醇化酶NSE表達情況:DCX表達陽性者為神經前體細胞, NSE表達陽性者為神經元樣細胞;所述DA、DB、DC三種分化培養液的配制方法分別為:DA分化培養液是由每1000ml DMEM-LG培養基中添加40ml FBS和10μg bFGF組成,其中bFGF的終濃度達10 ng/ml;DB分化培養液是由每1000ml的DMEM-LG培養基中添加50ml Cerebrolysin、4mgForskolin、5mg Insulin、0.36mg Hydrocortisone、1.86g KCl、7g NaCl、2.2g NaHCO3 、190mg NaH2 PO4 、95mg MgCl2 、222mg CaCl2 、1.8g D-glucose組成;其中各組分的終濃度達到 5% Cerebrolysin、10μM Forskolin、5 μg/ml Insulin、1 μM hydrocortisone、2.5mMKCl、 120 mM NaCl、26mM NaHCO3 、1.25 mM NaH2 PO4 、1 mM MgCl2 、2 mM CaCl2 、10 mM D-glucose;DC分化培養液是由每1000ml的DMEM-F12培養基中添加10μg bFGF、10μg EGF、10ml100XN2、20ml 50X B27、0.3g L-glutamine組成;其中各組分的終濃度達到:10 ng/ml EGF、10ng/ml bFGF、1X N2、1X B27、2mM L-glutamine;將DA、DB、DC三種分化培養液分別混勻并經過濾除菌后分別保存。
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專利技術附圖

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