本發(fā)明涉及用于在工業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)用于疫苗目的b型流感嗜血桿菌的莢膜多糖(PRP)的方法，根據(jù)所述方法，將b型流感嗜血桿菌(Hib)的菌株在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收獲該培養(yǎng)上清液，處理該培養(yǎng)上清液以便從其提取莢膜多糖，所述培養(yǎng)基包含至少：–一種碳源，–原卟啉，–鹽，–氨基酸，–NAD或NADH，–維生素，–pH調(diào)節(jié)手段，其特征在于所述培養(yǎng)基是在化學(xué)上確定的。

1.用于在工業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)用于疫苗目的的b型流感嗜血桿菌的莢膜多糖(PRP)的方法，
根據(jù)所述方法，將b型流感嗜血桿菌(Hib)的菌株在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收獲該培養(yǎng)上清液，處理
該培養(yǎng)上清液以便從其提取莢膜多糖，所述培養(yǎng)基包含至少：
– 一種碳源，
– 原卟啉，
– 鹽，
– 氨基酸，
– NAD或NADH，
– 維生素，
– pH調(diào)節(jié)手段，和
– 鋅，
其特征在于所述培養(yǎng)基中的每種成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)和量是完全確定的，且鋅的濃度對應(yīng)
于2.5 - 80 mg/L ZnSO₄.7H₂O。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基包含尿嘧啶或次黃嘌呤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述碳源包含以下至少一種：葡萄糖、果糖、半乳
糖、甘油、木糖、核糖、巖藻糖、唾液酸和乳酸鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)手段由緩沖鹽組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述原卟啉是合成的原卟啉IX。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述鹽選自鉀鹽、鎂鹽、鈉鹽、鈣鹽、鐵鹽、鋅鹽、
鈷鹽和錳鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6的方法，其特征在于所述鹽選自：K₂HPO₄；KH₂PO₄；MgSO₄.7H₂O；
Na₂HPO₄.12H₂O；NaH₂PO₄.2H₂O；CaCl₂.2H₂O；FeSO₄.7H₂O；ZnSO₄.7H₂O；CoCl₂. 6H₂O；MnSO₄.H₂O。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述氨基酸選自以下一種或多種：
精氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、組氨酸、色氨酸、纈氨
酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸或等效物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基至少包含精氨酸、丙氨酸、組氨酸、色
氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其特征在于用谷胱甘肽或半胱氨酸替代胱氨酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于所述維生素選自：硫胺素、泛酸鹽、生物素、
核黃素和吡哆醇。
12.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于用瓜氨酸替代尿嘧啶。
13.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其特征在于用瓜氨酸替代精氨酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于其還包括將獲得的莢膜多糖綴合至載體蛋
白的步驟。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其特征在于所述載體蛋白是破傷風(fēng)類毒素。
16.用于制備疫苗組合物的方法，所述方法包含根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)權(quán)利要求
的方法制備莢膜多糖的步驟。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其特征在于其還包括將獲得的莢膜多糖綴合至載體蛋白
的步驟。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于所述載體蛋白是破傷風(fēng)類毒素。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與用于針對
選自以下的一種或多種感染的進(jìn)行疫苗接種的至少一種或多種抗原組合的步驟：白喉、破
傷風(fēng)、脊髓灰質(zhì)炎、乙型肝炎、水痘、腮腺炎、風(fēng)疹、由腦膜炎奈瑟氏菌或肺炎鏈球菌引起的
感染、和由輪狀病毒引起的感染，以便獲得允許針對數(shù)種疾病同時(shí)免疫的疫苗組合。
20.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉、破傷
風(fēng)和乙型肝炎抗原組合的步驟。
21.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉類毒
素、破傷風(fēng)類毒素和2種無細(xì)胞百日咳博代氏桿菌抗原組合的步驟，所述2種無細(xì)胞百日咳
博代氏桿菌抗原為類毒素和絲狀血凝素。
22.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉類毒
素、破傷風(fēng)類毒素和3種無細(xì)胞百日咳博代氏桿菌抗原組合的步驟，所述3種無細(xì)胞百日咳
博代氏桿菌抗原為類毒素、百日咳桿菌粘附素和絲狀血凝素。
23.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉類毒
素、破傷風(fēng)類毒素和5種無細(xì)胞百日咳博代氏桿菌抗原組合的步驟，所述5種無細(xì)胞百日咳
博代氏桿菌抗原為類毒素、百日咳桿菌粘附素、凝集原類和絲狀血凝素。
24.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉類毒
素、破傷風(fēng)類毒素、數(shù)目為2、3或5種的無細(xì)胞百日咳博代氏桿菌抗原以及滅活的1、2和3型
脊髓灰質(zhì)炎病毒組合的步驟。
25.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與白喉類毒
素、破傷風(fēng)類毒素、乙型肝炎抗原、數(shù)目為2、3或5種的無細(xì)胞百日咳博代氏桿菌抗原以及滅
活的1、2和3型脊髓灰質(zhì)炎病毒組合的步驟。
26.根據(jù)權(quán)利要求17或18的方法，其特征在于其然后包含將獲得的綴合物與完整百日
咳博代氏桿菌細(xì)菌組合的步驟。