1.一種CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟(1):將磷酸卵磷脂和膽固醇溶于10倍體積的氯仿中,旋轉蒸發,直
至形成具有均勻薄膜的第一混合物;
步驟(2):向所述第一混合物中加入1/2第一混合物體積的氯仿,形成第二
混合物,再加入所述1/3第二混合物體積的CSN8shRNA質粒緩沖液室溫攪拌
4~8小時形成第三混合物;
步驟(3):將所述第三混合物在4~37℃條件下,30~50W功率水浴超聲處
理5~30分鐘,減壓蒸發除去有機溶劑,再補充與步驟(2)中所加氯仿同等體
積的緩沖液,再進行4~37℃條件下,30~50W功率水浴超聲處理5~30分鐘即得
脂質體混懸液;
步驟(4):將步驟(3)制得的脂質體混懸液通過0.1μm的微孔濾膜,
20000~36000g超速離心20~60min,上層即為所需的CSN8shRNA納米脂質體,
所述CSN8shRNA納米脂質體的直徑小于等于100nm。
2.根據權利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在
于,所述緩沖液為PBS、HEPES或生理鹽水。
3.根據權利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在
于,所述步驟(4)中將步驟(3)制得的脂質體混懸液通過0.1μm的微孔濾膜
后,再通過0.02μm的超濾膜進行過濾,取被截留液體,即可富集到所需的
CSN8shRNA納米脂質體。
4.根據權利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在
于,所述CSN8shRNA質粒是根據RNAi技術設計合成的針對CSN8的編碼基因
的siRNA(Small?interfering?RNA)編碼序列與表達載體連接而成的。
5.根據權利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在
于,所述CSN8shRNA質粒緩沖液中CSN8shRNA質粒的濃度為
1μg/ml~1000μg/ml。
6.根據權利要求1所述的CSN8shRNA納米脂質體的制備方法,其特征在
于,步驟(1)中磷酸卵磷脂和膽固醇的體積比為(1:1)~(10:1)。
展開