本發明公開了一種利用特異性探針底物測定細胞色素P450 2A6酶活的方法。具體的CYP 2A6酶活性測定的方法如下：選擇異戊烯基酚類化合物單體，如異甘草香豆素、異甘草酚、7?O?Methylluteone，作為細胞色素P450 2A6酶的高特異性探針底物，借助CYP體外孵育體系開展特異性底物的CYP催化反應，通過定量檢測單位時間內產物生成量或底物消耗量來測定各生物樣品中CYP 2A6酶的活性，以期實現對重要藥物代謝酶CYP 2A6酶活力的評估。

1.一種利用特異性探針底物測定細胞色素P450 2A6酶活的方法，其特征在于：該特異
性探針底物是具有異戊烯基的酚類化合物，其結構式見式(1)-(3)；

采用上述式(1)-(3)化合物之一作為底物，該類底物在P4502A6酶的催化下僅選擇性生
成單羥基化產物，通過檢測底物減少或產物生成量來測定生物樣本中P450 2A6酶的活性。
2.按照權利要求1所述利用特異性探針底物測定細胞色素P450 2A6酶活性的方法，其
特征在于：
(1)用異戊烯基酚類化合物單體中的一種作為特異性探針底物，底物的濃度范圍為
0.1-200μM，有機溶劑總量須低于1v/v％；
(2)在100mM磷酸鉀的pH＝7.0-8.0緩沖液體系中加入0.2-0.6mg/mL人肝微粒體、1-
10mM NADP、1-8mM G-6-P、1-3unit/mL G-6-P-DE和1-10mM氯化鎂的NADPH系統，反應溫度為
30-40℃，200μL孵化體系；
(3)體系中加入NADPH生成系統反應開始計時，反應30-120min，確保底物生成相應的單
羥基化產物達到檢測儀器的定量限，加入800-1200μL 4℃冷乙腈終止反應；
(4)含有甲醇的PBS作空白對照，測定單位時間內底物減少量或單羥基化產物生成量作
為細胞色素P450 2A6酶活性的評價標準。
3.按照權利要求1所述利用特異性探針底物測定細胞色素P450 2A6酶活的方法，其特
征在于，生物樣本為重組細胞色素P450亞酶、人及動物的肝微粒體、組織中的細胞色素P450
2A6酶的任意一種。