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一種適配子結合蛋白的檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-11
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710063369.0 
  • 技術(專利)名稱 一種適配子結合蛋白的檢測方法 
  • 項目單位 天津醫科大學
  • 發明人 張鍇,柏雪,畢文靜 
  • 行業類別 醫藥制造-生物藥品
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 褚沈欣
  • 發布時間 2022-02-11  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種可以特異、靈敏地檢測適配子結合蛋白的分析方法。該方法通過識別探針去招募結合蛋白,利用DNA雙鏈雜交的方式將光交聯基團引入到結合蛋白,并通過光引發將結合蛋白共價鍵合到捕捉探針上,實現了適配子結合蛋白的高效鑒定。本方法解決了由于適配子與結合蛋白作用力較弱,適配子結合蛋白難以鑒定的問題,適用于豐度較低的、結合力較弱的適配子互作蛋白分析。本發明的探針合成過程簡單、選擇性好、靈敏度高,可以實現對實際體系中適配子結合蛋白的特異性檢測與富集。
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  • 02

    說明書

    1.一種雙探針,包括識別探針和捕捉探針,其特征在于:所述識別探針是單鏈寡核苷酸,包括串聯連接的適配子序列和被捕捉序列;所述捕捉探針包括捕捉序列以及修飾在捕捉探針上的光交聯基團和報告基團,所述捕捉序列是單鏈寡核苷酸;識別探針上的適配子序列用于識別并結合適配子結合蛋白,捕捉探針的捕捉序列用于識別識別探針上的被捕捉序列,并通過堿基互補作用與識別探針的被捕捉序列結合;所述適配子結合蛋白是溶菌酶;所述識別探針的被捕捉序列位于適配子序列的3’端,并且光交聯基團位于捕捉探針的3’端,報告基團位于捕捉探針的5’端;或者所述識別探針的被捕捉序列位于適配子序列的5’端,并且光交聯基團位于捕捉探針的5’端,報告基團位于捕捉探針的3’端;所述識別探針的被捕捉序列為5’-ATG TCG CTG TAG-3’;所述捕捉探針的捕捉序列為5’-CTA CAG CGA CAT-3’;所述的適配子序列為5’-ATC AGG GCT AAA GAG TGC AGA GTT ACT TAG-3’;所述捕捉探針的捕捉序列和光交聯基團之間具有延長臂序列,延長臂序列為-TTG-(CH2)6-,其中-TTG-與捕捉序列相連,-(CH2)6-與光交聯基團連接;所述捕捉探針的捕捉序列和報告基團之間具有懸臂序列,所述懸臂序列為-Z-,其中Z為含有m個堿基的序列,m為3-9。2.如權利要求1所述的雙探針,其特征在于,所述識別探針為:5’-ATC AGG GCT AAAGAG TGC AGA GTT ACT TAG ATG TCG CTG TAG-3’。3.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述懸臂序列中m為6。4.如權利要求3所述的雙探針,其特征在于,所述懸臂序列為TTT TTT。5.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述捕捉探針為5’-報告基團-TTT TTT CTA CAG CGA CAT TTG-(CH2)6-X-光交聯基團,X為酰胺鍵或由疊氮炔點擊化學反應所形成的五元環。6.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述的報告基團選自生物素或熒光化合物。7.如權利要求6所述的雙探針,其特征在于,所述的熒光化合物是熒光素類、羅丹明類、菁染料、二苯乙烯類、萘酰亞胺類、香豆素類、吖啶類或芘類。8.如權利要求6所述的雙探針,其特征在于,所述的熒光化合物為異硫氰酸熒光素、羧基熒光素、四氯熒光素、六氯熒光素、四乙基羅丹明、四甲-6-羧羅丹明、羧基四甲基異硫氰酸酯、四甲基異硫氰酸羅丹明、噻唑橙、Cy3、Cy5、噁唑橙或藻紅蛋白。9.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述的光交聯基團是雙吖丙啶、二苯甲酮或芳香疊氮類化合物。10.如權利要求9所述的雙探針,其特征在于,所述芳香疊氮類化合物是疊氮苯。11.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述捕捉探針為5’-熒光化合物-TTT TTT CTA CAG CGA CAT TTG-(CH2)6-X-光交聯基團,或者5’Biotin-TTT TTT CTACAGCGA CAT TTG-(CH2)6-X-光交聯基團。12.如權利要求1-2任一項所述的雙探針,其特征在于,所述捕捉探針為5’FAM-TTT TTTCTA CAG CGA CAT TTG-(CH2)6-NH-CO-雙吖丙啶,或5’Biotin-TTT TTT CTA CAG CGA CATTTG-(CH2)6-NH-CO-雙吖丙啶。13.一種試劑盒,其特征在于,含有權利要求1-12任一項所述的雙探針。14.一種非疾病診斷目的的溶菌酶的檢測或富集方法,其特征在于:使用權利要求1-12任一項所述的雙探針或者權利要求13所述的試劑盒。15.如權利要求14所述的檢測或富集方法,其特征在于:所述方法包括以下步驟:1)將識別探針加入樣品中,孵育;2)將捕捉探針加入步驟1)得到的樣品中,孵育;3)將步驟2)得到的樣品進行光照;4)通過報告基團檢測或富集溶菌酶。16.權利要求1-12任一項所述的雙探針在制備檢測或富集溶菌酶的試劑或試劑盒中的用途。
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