本發(fā)明公開(kāi)了一種用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)步驟如下：（1）提取病原微生物基因組和基因組片段化；（2）設(shè)計(jì)和制備探針；（3）探針與基因組DNA片段進(jìn)行雜交反應(yīng)；（4）探針與雜交體固定于丙烯酰胺膠中，電泳去除未雜交上去的片段和未膠連上去的分子；（5）核酸分子固相原位擴(kuò)增；（6）信號(hào)檢測(cè)，判斷病原菌是否存在。本發(fā)明采用單個(gè)核苷酸分子捕獲、擴(kuò)增與檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了原病微生物快速高效檢測(cè)的目的，具有十分重要的應(yīng)用前景和使用價(jià)值。本發(fā)明不僅可用于微生物鑒定，還可用于實(shí)驗(yàn)室、生產(chǎn)和臨床中某些含量較低，且具有重要分析或診斷意義的分子的檢測(cè)。

1.一種用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，檢測(cè)步驟如下：（1）分離待檢測(cè)食品中的微生物，并提取基因組DNA；采用超聲波或DNA破碎酶將上述基因組DNA隨機(jī)打斷成200～1000bp的片段；（2）針對(duì)步驟（1）中分離出的微生物的特異片段設(shè)計(jì)探針，用DNA合成儀合成一條探針，并用丙烯酰胺對(duì)探針進(jìn)行標(biāo)記；（3）將步驟（2）中標(biāo)記后的探針與步驟（1）中打斷的基因組DNA片段雜交；（4）將步驟（3）中雜交后的溶液與丙烯酰胺貯存液混合，將均勻混合液平鋪于基片上進(jìn)行凝固形成膠，然后用非變性電泳液電泳去除未雜交上去的片段和未膠連上去的分子；（5）向步驟（4）中電泳后的膠上滴加核酸分子擴(kuò)增反應(yīng)液、核酸熒光染料混合液，將混合液與膠一起密封在基片上并置于控溫裝置中，進(jìn)行核酸分子原位擴(kuò)增；（6）用分辨率高于2048×2048?的熒光顯微鏡或掃描儀進(jìn)行熒光信號(hào)采集，根據(jù)陽(yáng)性點(diǎn)的數(shù)量判斷待檢測(cè)樣本的病原菌是否存在。2.根據(jù)權(quán)利要求1?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述病原微生物為細(xì)菌、真菌、病毒、支原體和藻類，來(lái)自于食品。3.根據(jù)權(quán)利要求2?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述病原微生物是含有特征核酸分子的病原體，所述特征核酸分子為單鏈或雙鏈RNA、DNA直鏈核酸分子或環(huán)形核酸分子。4.根據(jù)權(quán)利要求1?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（4）中的基片為載玻片、硅片或芯片。5.根據(jù)權(quán)利要求1?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（5）中的核酸分子原位擴(kuò)增技術(shù)為PCR?原位擴(kuò)增或恒溫原位擴(kuò)增。6.根據(jù)權(quán)利要求5?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述原位擴(kuò)增采用原位單分子在三維膠內(nèi)進(jìn)行。7.根據(jù)權(quán)利要求1?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（5）中的核酸熒光染料為SYBR?Green?Ⅰ、Genefinder?和Geneview?中的至少一種。8.根據(jù)權(quán)利要求7?所述的用于食品病原微生物鑒定的單個(gè)核酸分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述核酸分子熒光染料與核酸分子擴(kuò)增反應(yīng)混合物一起添加或在擴(kuò)增反應(yīng)后添加。