本發(fā)明屬于分子生物學技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種基于免疫沉淀法的從水稻中提取多聚核糖體的方法。本發(fā)明以免疫法為主，使用親和層析的方法富集Flag標簽標記的核糖體?mRNA復合物，選用EGTA螯合組織勻漿液中的其它金屬離子，并加入氯霉素和放線菌酮抑制核糖體和mRNA的解離，其中改進抽提溶液和洗脫溶液配方、材料勻漿和濃縮方式，使用終濃度為0.1M的EDTA洗脫核糖體?mRNA復合物。本發(fā)明預期將分離2?4個重要的參與低溫脅迫的新功能基因，為低溫脅迫下的植物生長正常進行以及繁衍提供保障，最終在產(chǎn)量建成上發(fā)揮重要作用。

1.一種基于免疫沉淀法的從水稻中提取多聚核糖體的方法，其特征在于具體步驟為：
（1）首先，構(gòu)建融合Flag標簽的核糖體蛋白RPL18的過表達水稻植株，在此轉(zhuǎn)基因植物
體內(nèi)得到Flag標簽標記的核糖體-mRNA復合物；
其中，所述的融合Flag標簽的核糖體蛋白RPL18在水稻中有6個基因編碼，其中3個屬
RPL18A，另外3個屬RPL18B，選取兩個屬種各一個代表基因，即選取SEQ.ID.NO.1和
SEQ.ID.NO.2兩個氨基酸對應(yīng)的基因添加標簽；
所述的過表達植株通過構(gòu)建融合Flag標簽的SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2對應(yīng)的基因
序列的植物表達載體，分別轉(zhuǎn)入水稻日本晴中，以使融合蛋白在35S啟動子及Ω-HF增強子
的啟動下實現(xiàn)過表達；
（2）其次，使用親和層析方法，將此Flag標簽標記的核糖體-mRNA復合物富集起來，具體
是選用EGTA溶液對組織勻漿液進行螯合，并加入氯霉素和放線菌酮抑制核糖體和mRNA的解
離；其中，改進抽提溶液和洗脫溶液配方、材料勻漿和濃縮方式，使用終濃度為0.1M的EDTA
洗脫核糖體-mRNA復合物；具體步驟為：
首先，進行植物組織的破碎，所用的材料勻漿要求加入材料二倍體積的PEB于液氮研磨
的材料粉末之中，并在液氮中共研；
所述的EGTA溶液保持溶液中高濃度的鎂離子狀態(tài)，配制母液0.5M EGTA，用NaOH調(diào)至
pH8.0；
所述的氯霉素和放線菌酮能夠有效抑制核糖體和mRNA的解離，配制母液50mg/mL 放線
菌酮，乙醇溶解；50mg/mL 氯霉素，乙醇溶解；
其次，用親和層析的方法富集多聚核糖體，使用超濾的方法將抽提溶液逐步置換為洗
脫溶液；同時，超濾也去除一部分低分子量的成分，減少了雜質(zhì)；
在抽提溶液體系中，加入終濃度為20U/ml的RNAsin；
所述的洗脫溶液也是體系與Flag beads結(jié)合時的溶液，配方中除去DTT成分，僅靠PMSF
來防止蛋白質(zhì)降解；
最后，將富集的多聚核糖體上的mRNA洗脫下來，在高濃度EDTA的存在下，由于鎂離子被
結(jié)合，核糖體-RNA復合物會發(fā)生解離；
洗脫用的洗脫溶液為終濃度0.1M EDTA，配制母液0.5M EDTA，用NaOH調(diào)至pH8.0；
所述抽提溶液組分含量如下：
洗脫溶液組分含量如下：
所述去垢混合液的組分含量為：20% Brig-35，20% Triton X-100，20% NP-40，20%
Tween 20。