本發(fā)明涉及乳糖在提高重組菌表達(dá)CbFDH酶的穩(wěn)定性中的應(yīng)用，通過將乳糖添加至表達(dá)CbFDH酶的重組菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明首次公開了乳糖在提高甲酸脫氫酶活性和穩(wěn)定性中所起的特殊作用；通過發(fā)明人的實(shí)際實(shí)驗(yàn)，在培養(yǎng)表達(dá)CbFDH酶重組菌的過程中，向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入特定濃度的乳糖后，CbFDH酶活力較常規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)基提高了11.9倍，同時(shí)穩(wěn)定性也得到大幅提升。

1.乳糖在提高重組菌表達(dá)的單位重量的CbFDH酶酶活、降低重組菌表達(dá)的CbFDH酶用量、或者提高重組菌表達(dá)CbFDH酶穩(wěn)定性中的應(yīng)用，通過將乳糖添加至表達(dá)CbFDH酶的重組菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基，組份如下：蛋白胨9～11g/L，酵母提取物4.5～5.5g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 8～10g/L，KH₂PO₄ 6.5～7.0g/L，NH₄Cl 3～3.5g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，乳糖3.5～5.5g/L，CaCl₂ 0.015～0.025g/L，甘油按體積百分比計(jì)0.7～0.8％，pH6.8～7.2；所述重組菌的構(gòu)建方法如下：PCR擴(kuò)增獲得來源于博伊丁假絲酵母(Candida boidinii)的甲酸脫氫酶基因fdh，基因序列如SEQ ID NO.2所示，將擴(kuò)增后的甲酸脫氫酶基因fdh連接至大腸桿菌表達(dá)載體pET28a(+)，構(gòu)建獲得攜帶fdh基因的重組表達(dá)載體pET28a(+)-fdh，轉(zhuǎn)化宿主菌大腸桿菌BL21(DE3)，挑取轉(zhuǎn)化子，篩選獲得表達(dá)甲酸脫氫酶的重組大腸桿菌E.coli BL21-fdh。2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述乳糖濃度為3.5～5g/L。3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述乳糖濃度為4.5～5g/L。4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基，組份如下：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 9g/L，KH₂PO₄ 6.8g/L，NH₄Cl 3.3g/L，葡萄糖0.5g/L，乳糖4.5～5g/L，CaCl₂ 0.02g/L，甘油按體積百分比計(jì)0.74％，pH7.0。5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下：將表達(dá)CbFDH酶的重組菌接種于含有乳糖的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28～32℃、150～180rpm條件下培養(yǎng)16～18h，收集菌體，經(jīng)細(xì)胞破碎，離心，收集上清液，制得甲酸脫氫酶CbFDH。6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)胞破碎，步驟如下：將菌體按質(zhì)量體積比1:(15～25)的比例與pH7.5的磷酸緩沖液混合均勻，單位g/ml；在195W的超聲波條件下、采用間歇超聲波處理方式進(jìn)行細(xì)胞破碎6min，每次超聲波破碎時(shí)間3s，間歇時(shí)間5s。7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述離心條件為：3000r/min離心2min。8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的上游擴(kuò)增引物序列如SEQ IDNO.3所示，下游擴(kuò)增引物序列如SEQ ID NO.4所示。